導入外源性野生型p53基因對肝癌細胞凋亡作用的研究.pdf

1、全文共三部分.第一部分,融合基因wtp53/PGFP構建表達及對大鼠肝癌細胞的凋亡研究.目的：利用新型分子探針綠色熒光蛋白基因（GFP）,與野生型p53基因（wild-type p53 gene）構建成融合基因,便于直接、實時、定位觀察p53在細胞內的表達及定位情況.結論：1、加用Plus試劑比單用lipofectAMINE不僅可以提高轉染效率,而且縮短轉染時間.2、在構建融合基因過程中,選擇恰當的多克隆酶切位點進行亞克隆技術,省時、省

2、力、節(jié)省費用.3、p53綠色融合蛋白可作為p53基因表達的直接標記,便于直觀了解p53在細胞內的表達及定位情況.第二部分,導入外源性野生基因p53及合用TNF-α對肝癌細胞的凋亡作用及與Bax的表達關系研究.目的：通過補充外源性的野生型p53基因,觀察其對人肝癌Hep3B細胞的凋亡作用,并探討p53與Bax表達關系;并聯合應用TNFα,觀察對凋亡的影響作用及抑制.結論：1、對于抑癌基因缺失或突變的細胞恢復野生型p53的活性,可以誘導凋亡

3、,促進癌細胞死亡.2、p53通過上調Bax表達可能是促進細胞凋亡的旁路之一.3、聯合應用TNF-α后,肝癌細胞凋亡作用明顯,主要是由于TNF-α上調線粒體膜上的Bax以促進凋亡,使Bax/Bcl-2比值增高而促進凋亡發(fā)生.4、聯合應用基因療法和細胞因子,可能是對肝癌癥進行治療的有效手段.第三部分,人重組正義tRNA<'Ser(CGA)>基因的構建表達及在Hep3B中對wtp53基因的作用研究.目的：通過構建人重組正義tRNA<'Ser(

4、CGA)>基因對p53表達影響.結論：1、成功的構建了與人類密碼子UCG相匹配的轉運RNA（pSV2<,neo>tRNA<'Ser(CGA)>）,而UCG在人類利用率極低,提出了補充與罕見密碼子相匹配的轉運RNA,從而提高其利用率,在轉染后翻譯水平提高蛋白表達的新思路.2、共轉染可以提高蛋白質表達作用,可能與一過性提高啟動子的活性有關.3、該研究所用的tRNA<'Ser(CGA)>與空載體相比對提高p53蛋白表達無明顯差異,提示單純補充