放射控導的野生型p53蛋白正反饋基因環(huán)路提高肺腺癌細胞對放射敏感性的實驗研究.pdf

1、第三軍醫(yī)大學博士學位論文放射控導的野生型p53蛋白正反饋基因環(huán)路提高肺腺癌細胞對放射敏感性的實驗研究姓名：毛麗偉申請學位級別：博士專業(yè)：腫瘤學指導教師：陳正堂20080501第三軍醫(yī)大學博士學位論文因與細胞基因組整合情況。1)wt—p53蛋白正反饋基因環(huán)路的鑒定采用免疫組化法獲得Ad5CMVp53感染H1299(p53一／一)細胞最佳感染復數；以最佳感染復數(MOI=40)感染pR4一p53一EGFP／H1299細胞(VP組)，設質粒組

2、(P組)和單純病毒感染組(V組)為對照組，western七lot方法鑒定不同時相點各組細胞wt—p53蛋白表達情況。2)cArGs放射敏感性的鑒定Westernblot方法檢測pE6一p53一EGFP／H1299細胞在不同放射劑量及同一放射劑量不同時相點wt—p53蛋白表達量和持續(xù)時間。3)放射控導的wt—p53蛋白正反饋基因環(huán)路動力學特征檢測倒置熒光顯微鏡及流式細胞儀分析不同放射劑量的EGFP分布情況；westemblot檢測pE6R

3、4一p53一EGFP／H1299細胞在不同放射劑量和同一放射劑量不同時相點的wt—p53蛋白表達量和持續(xù)時問。3體外分析放射控導的wt—p53蛋白正反饋基因環(huán)路的抗癌生物學效應給予治療組pE6R4一p53一EGFP／H1299細胞和對照組pcDNA31()一p53一EGFP／H1299細胞、pE6一p53一EGFP／H1299細胞、pR4一p53一EGFP／H1299和H1299(p53一／一)細胞4Gy8MVX線照射，分析該環(huán)路在放射

4、線誘導下對肺腺癌細胞周期和細胞凋亡率的影響；繪制細胞放射劑量一存活曲線，計算Do值及放射增敏比。4分析放射控導的wt—p53蛋白正反饋基因環(huán)路對肺腺癌細胞裸鼠移植瘤模型生物學行為的影響將治療組pE6R4一p53一EGFPml299細胞和對照組pE6一p53一EGFPml299、pR4一p53一EGFP／H1299、H1299(p53一／一)細胞分別注射于裸鼠背部皮下，建立裸鼠移植瘤模型；分別給予射線照射，記錄治療開始后腫瘤體積的變化，繪