放射控導(dǎo)的野生型p53蛋白正反饋基因環(huán)路提高肺腺癌細(xì)胞對放射敏感性的實驗研究.pdf

1、第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文放射控導(dǎo)的野生型p53蛋白正反饋基因環(huán)路提高肺腺癌細(xì)胞對放射敏感性的實驗研究姓名：毛麗偉申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：陳正堂20080501第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文因與細(xì)胞基因組整合情況。1)wt—p53蛋白正反饋基因環(huán)路的鑒定采用免疫組化法獲得Ad5CMVp53感染H1299(p53一／一)細(xì)胞最佳感染復(fù)數(shù)；以最佳感染復(fù)數(shù)(MOI=40)感染pR4一p53一EGFP／H1299細(xì)胞(VP組)，設(shè)質(zhì)粒組

2、(P組)和單純病毒感染組(V組)為對照組，western七lot方法鑒定不同時相點各組細(xì)胞wt—p53蛋白表達(dá)情況。2)cArGs放射敏感性的鑒定Westernblot方法檢測pE6一p53一EGFP／H1299細(xì)胞在不同放射劑量及同一放射劑量不同時相點wt—p53蛋白表達(dá)量和持續(xù)時間。3)放射控導(dǎo)的wt—p53蛋白正反饋基因環(huán)路動力學(xué)特征檢測倒置熒光顯微鏡及流式細(xì)胞儀分析不同放射劑量的EGFP分布情況；westemblot檢測pE6R

3、4一p53一EGFP／H1299細(xì)胞在不同放射劑量和同一放射劑量不同時相點的wt—p53蛋白表達(dá)量和持續(xù)時問。3體外分析放射控導(dǎo)的wt—p53蛋白正反饋基因環(huán)路的抗癌生物學(xué)效應(yīng)給予治療組pE6R4一p53一EGFP／H1299細(xì)胞和對照組pcDNA31()一p53一EGFP／H1299細(xì)胞、pE6一p53一EGFP／H1299細(xì)胞、pR4一p53一EGFP／H1299和H1299(p53一／一)細(xì)胞4Gy8MVX線照射，分析該環(huán)路在放射

4、線誘導(dǎo)下對肺腺癌細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡率的影響；繪制細(xì)胞放射劑量一存活曲線，計算Do值及放射增敏比。4分析放射控導(dǎo)的wt—p53蛋白正反饋基因環(huán)路對肺腺癌細(xì)胞裸鼠移植瘤模型生物學(xué)行為的影響將治療組pE6R4一p53一EGFPml299細(xì)胞和對照組pE6一p53一EGFPml299、pR4一p53一EGFP／H1299、H1299(p53一／一)細(xì)胞分別注射于裸鼠背部皮下，建立裸鼠移植瘤模型；分別給予射線照射，記錄治療開始后腫瘤體積的變化，繪