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文檔簡介
1、目的:卵巢癌是婦科死亡率最高的惡性腫瘤之一,五年生存率僅30%左右,傳統(tǒng)方法治療效果較差,因此有必要尋找新的治療方法?;蛑委熓且环N較有前景的治療方法,新基因的發(fā)現(xiàn)常常能夠促進對腫瘤發(fā)生發(fā)展的認識,并有可能發(fā)展成為腫瘤治療的新方法。PNAS-4是實驗室發(fā)現(xiàn)的一個新基因,它廣泛存在于動物和植物體中,初步實驗證明其可誘導癌細胞凋亡,抑制腫瘤生長。但是對該基因功能的研究目前還較少,對卵巢癌的作用研究尚未進行。為此該課題設計觀察新基因h-PNA
2、S-4對卵巢癌是否有抗腫瘤作用,是否能成為卵巢癌治療的新方法。 方法:用脂質體轉染法,將與靶載體連接好的產(chǎn)物h-PNAS-4-PcDNA3.1轉染人卵巢癌上皮細胞SKOV3。用RT-PCR檢測h-PNAS-4在轉染后卵巢癌細胞中的過表達;用MTT法檢測卵巢癌細胞增殖抑制情況;用瓊脂糖凝膠電泳(DNA-Ladder)檢測細胞凋亡;用Hoechst33528染色觀察凋亡細胞形態(tài);用流式細胞術(FCM)檢測細胞凋亡率和細胞周期;用SK
3、OV3建立卵巢癌裸鼠動物模型。每周兩次,50μg質粒/只,裸鼠尾靜脈注射給藥,共治療十一次。用游標卡尺測量并記錄裸鼠腫瘤最長徑和最短徑,計算腫瘤體積并繪制腫瘤體積-時間曲線。用HE染色觀察腫瘤組織性狀;用免疫組化檢測血管上皮特異性標記CD31的表達并計算組織內微血管密度(MVD),用Tunel染色檢測腫瘤組織原位凋亡;同時觀察裸鼠一般狀態(tài)以及對心、肝、脾、肺、腎的毒副作用的形態(tài)學進行觀察。 結論: 1、h-PNAS-4-
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