新基因h-PNAS-4治療卵巢癌的實驗研究.pdf

1、目的：卵巢癌是婦科死亡率最高的惡性腫瘤之一，五年生存率僅30％左右，傳統(tǒng)方法治療效果較差，因此有必要尋找新的治療方法?；蛑委熓且环N較有前景的治療方法，新基因的發(fā)現(xiàn)常常能夠促進對腫瘤發(fā)生發(fā)展的認識，并有可能發(fā)展成為腫瘤治療的新方法。PNAS-4是實驗室發(fā)現(xiàn)的一個新基因，它廣泛存在于動物和植物體中，初步實驗證明其可誘導癌細胞凋亡，抑制腫瘤生長。但是對該基因功能的研究目前還較少，對卵巢癌的作用研究尚未進行。為此該課題設計觀察新基因h-PNA

2、S-4對卵巢癌是否有抗腫瘤作用，是否能成為卵巢癌治療的新方法。 方法：用脂質體轉染法，將與靶載體連接好的產(chǎn)物h-PNAS-4-PcDNA3.1轉染人卵巢癌上皮細胞SKOV3。用RT-PCR檢測h-PNAS-4在轉染后卵巢癌細胞中的過表達；用MTT法檢測卵巢癌細胞增殖抑制情況；用瓊脂糖凝膠電泳(DNA-Ladder)檢測細胞凋亡；用Hoechst33528染色觀察凋亡細胞形態(tài)；用流式細胞術(FCM)檢測細胞凋亡率和細胞周期；用SK

3、OV3建立卵巢癌裸鼠動物模型。每周兩次，50μg質粒/只，裸鼠尾靜脈注射給藥，共治療十一次。用游標卡尺測量并記錄裸鼠腫瘤最長徑和最短徑，計算腫瘤體積并繪制腫瘤體積-時間曲線。用HE染色觀察腫瘤組織性狀；用免疫組化檢測血管上皮特異性標記CD31的表達并計算組織內微血管密度(MVD)，用Tunel染色檢測腫瘤組織原位凋亡；同時觀察裸鼠一般狀態(tài)以及對心、肝、脾、肺、腎的毒副作用的形態(tài)學進行觀察。 結論： 1、h-PNAS-4-