Flavopiridol聯(lián)合泰素治療卵巢癌的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究目的: 一.檢測flavopiridol和泰素兩種藥物在體外對SKOV3細(xì)胞存活率及凋亡情況的影響，判斷兩種藥物有無協(xié)同作用，若有協(xié)同作用，探討其發(fā)生的可能機(jī)制； 二.建立卵巢癌腹腔移植瘤和皮下移植瘤模型，研究flavopiridol和泰素對腫瘤的體內(nèi)治療作用，判斷兩種藥物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)有無協(xié)同作用。 材料和方法: 一.CCK8法測定flavopiridol和泰素單獨(dú)應(yīng)用及聯(lián)合應(yīng)用對SKOV3細(xì)胞的存活率影

2、響； 二.流式細(xì)胞術(shù)及TUNEL法檢測細(xì)胞在不同藥物處理組細(xì)胞凋亡情況的改變，用比色法測定各組caspase-3活性改變，并測定SKOV3細(xì)胞在泰素作用24小時(shí)后不同時(shí)間caspase-3活性變化； 三.RT-PCR分析藥物不同處理組細(xì)胞周期素D1表達(dá)情況的改變。 四.以SKOV3細(xì)胞株在5-6周齡BALB/c裸鼠建立卵巢癌腹腔移植瘤和皮下移植瘤模型，通過腫瘤大小觀察，抑瘤率計(jì)算，TUNEL檢測及免疫組化法測定微

3、血管密度來判斷flavopiridol和泰素單獨(dú)治療和聯(lián)合應(yīng)用的療效。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果: 一.細(xì)胞存活率測定 300nMflavopiridol和1μM泰素單獨(dú)治療24小時(shí)均可引起SKOV3細(xì)胞增殖受抑制。泰素作用24小時(shí)后給予flavopiridol治療24小時(shí)的聯(lián)合治療方案可以對細(xì)胞增殖抑制產(chǎn)生明顯的協(xié)同作用(P＜0.001)。 二.SKOV3細(xì)胞凋亡情況檢測 細(xì)胞分為300nMflavopirid

4、ol24小時(shí)(F24)，1μM泰素24小時(shí)(T24)，1μM泰素24小時(shí)后無藥培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時(shí)(T24+ND24)，1μM泰素24小時(shí)后300nMflavopiridol處理24小時(shí)(T24+F24)以及無藥培養(yǎng)基處理24小時(shí)(ND24)這五種處理。流式細(xì)胞儀檢測提示兩藥均可導(dǎo)致細(xì)胞凋亡率升高，T24+ND24組凋亡率高于T24組，T24+F24處理組較F24和T24+ND24處理組的凋亡率高，兩藥存在協(xié)同效應(yīng)。TUNEL檢測支持以上

5、結(jié)果。聯(lián)合用藥在激活caspase-3活性方面也具有協(xié)同作用。 泰素作用24小時(shí)后，隨著SKOV3細(xì)胞在不含藥物培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)時(shí)間延長(0-360分鐘)，caspase-3活性不斷增高。 三.flavopiridol和泰素對細(xì)胞周期素D1表達(dá)的影響 flavopiridol可以下調(diào)SKOV3細(xì)胞的細(xì)胞周期素D1表達(dá)，泰素對其表達(dá)無影響，兩藥合用對下調(diào)細(xì)胞周期素D1表達(dá)有協(xié)同作用。 四.flavopirido

6、l和泰素體內(nèi)實(shí)驗(yàn)療效 腹腔移植瘤模型因小鼠死亡率過高未作統(tǒng)計(jì)分析。 Flavopiridol和泰素兩種藥物單獨(dú)治療，對小鼠皮下移植瘤模型有良好的抑瘤效果(抑瘤率分別為84.5％和85.7％)，泰素后7小時(shí)或24小時(shí)給予flavopiridol的聯(lián)合治療組抑瘤作用稍差(分別為60.6％和68.9％)。TUNEL染色證實(shí)，單藥治療組腫瘤組織凋亡比例更大，聯(lián)合治療組也存在部分凋亡，無治療組組織幾乎無凋亡。MVD測定單藥治療組M

7、VD明顯降低，聯(lián)合治療組MVD較對照組也有明顯降低，但較單藥治療高。 結(jié)論: 1.Flavopiridol和泰素兩種藥物單獨(dú)治療對體外殺傷SKV03細(xì)胞，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡均有明確療效，先泰素后flavopiridol的聯(lián)合治療方案較這兩種藥物單獨(dú)使用可以達(dá)到協(xié)同效應(yīng)。 2.Flavopiridol和泰素的體外協(xié)同作用可能產(chǎn)生于它們對caspase-3活性激活和細(xì)胞周期素D1下調(diào)的協(xié)同作用。 3.瘤體內(nèi)給藥方式