鴉膽子油乳體外對(duì)人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞(HCT15)增殖和凋亡及PTEN、Bcl-2表達(dá)的影響.pdf

1、目的:
　　鴉膽子油乳是以鴉膽子仁石油醚提取物為原料,以精致大豆磷脂為乳化劑制成的水包油型乳劑。對(duì)多種腫瘤有良好的療效,其可能的作用機(jī)制為:選擇性破壞腫瘤的細(xì)胞膜和線粒體;抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)和DNA合成,阻斷癌細(xì)胞的細(xì)胞周期;升白細(xì)胞作用;提高機(jī)體免疫力;對(duì)多種藥物的耐藥有逆轉(zhuǎn)作用等。本實(shí)驗(yàn)以鴉膽子油乳為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,研究鴉膽子油乳體外抑制人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞(HCT15)增殖和凋亡的影響,探討PTEN、Bcl-2表達(dá)的變化。為鴉膽子油乳用于

2、結(jié)直腸癌治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　1.培養(yǎng)HCT15細(xì)胞。
　　2.取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞至96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中。
　　3.加入三種不同濃度的鴉膽子油乳48小時(shí)后,用顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況。
　　4.用CCK8試劑檢測(cè)不同濃度的鴉膽子油乳酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度。
　　5.提取HCT15細(xì)胞RNA以及加了鴉膽子油乳的HCT15細(xì)胞RNA,然后進(jìn)行RT-PCR實(shí)驗(yàn),檢測(cè)促凋亡基因PTEN以及凋

3、亡抑制基因Bcl-2表達(dá)水平的變化。
　　6.用流式細(xì)胞儀以FL3通道檢測(cè),結(jié)果通過(guò)Modfit軟件進(jìn)行分析,觀察鴉膽子油乳對(duì)人結(jié)腸腺癌細(xì)胞(HCT15)細(xì)胞周期的影響。
　　結(jié)果:
　　1.CCK8法顯示三組濃度鴉膽子油乳(10ug/ml,20ug/ml,40ug/ml)對(duì)人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞(HCT15)作用48小時(shí)后,有明顯的抑制作用,存在量效關(guān)系。
　　2.取鴉膽子油乳組細(xì)胞及未加藥組細(xì)胞進(jìn)行RT-PCR實(shí)驗(yàn)

4、顯示:在鴉膽子油乳作用下,PTEN基因的表達(dá)升高,Bcl-2基因的表達(dá)水平降低,在mRNA水平證明鴉膽子油乳可促使細(xì)胞凋亡發(fā)生,抑制了HCT15細(xì)胞的增殖。
　　3.用流式細(xì)胞儀檢測(cè)鴉膽子油乳對(duì)HCT15細(xì)胞周期的影響,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:加入鴉膽子油乳大量細(xì)胞阻滯在S期,無(wú)法順利完成細(xì)胞周期。
　　結(jié)論:
　　1.鴉膽子油乳體外抑制人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞增殖,能阻滯細(xì)胞DNA的合成,可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
　　2.凋亡過(guò)程中檢測(cè)