細(xì)胞周期素Cyclin B1對(duì)紫杉醇誘導(dǎo)食管癌細(xì)胞凋亡調(diào)控作用的研究.pdf

1、食管癌是人類最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。目前食管癌在全世界的發(fā)病率占所有惡性腫瘤的第八位，因食管癌導(dǎo)致的死亡人數(shù)占所有腫瘤死亡患者的5.7％。我國(guó)是食管癌的高發(fā)區(qū)，世界上70％的食管癌發(fā)生在我國(guó)，由于診斷較晚治療效果較差，食管癌的五年生存率僅10％左右，在我國(guó)的惡性腫瘤死亡率中居第四位。在食管癌化療中，抑制微管蛋白聚合和微管解聚從而引起細(xì)胞凋亡的藥物是非常重要的一類，紫杉醇是這類藥物中常用的藥物。研究表明，細(xì)胞周期素CyclinB1和微管損傷

2、誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡有重要聯(lián)系。 CyclinB1是調(diào)控細(xì)胞由G2期向M期轉(zhuǎn)換的重要因子之一。G2期末CyclinB1的表達(dá)達(dá)到高峰，激活CDC2，形成CyclinB1/CDC2復(fù)合物，進(jìn)入細(xì)胞核，裂解一系列底物蛋白，推動(dòng)細(xì)胞從DNA合成期進(jìn)入有絲分裂期。 本實(shí)驗(yàn)室采用免疫組織化學(xué)的方法分別比較205例配對(duì)食管癌癌組織和癌旁組織的CyclinB1蛋白表達(dá)水平的差異，發(fā)現(xiàn)在食管癌細(xì)胞中存在CyclinB1高表達(dá)的現(xiàn)象。挑選了Cy

3、clinB1低表達(dá)的KYSE150細(xì)胞株采用轉(zhuǎn)染的方法，外源導(dǎo)入pCDNA3.1CyclinB1質(zhì)粒，構(gòu)建CyclinB1高表達(dá)的穩(wěn)定細(xì)胞株。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明CyclinB1高表達(dá)能增強(qiáng)細(xì)胞的增殖能力、致瘤性以及穿透能力，抑制順鉑誘導(dǎo)的食管癌細(xì)胞凋亡。 為了深入研究CyclinB1蛋白表達(dá)水平對(duì)食管癌細(xì)胞的影響，我們用Westernblot的方法挑選了CyclinB1高表達(dá)的EC9706細(xì)胞株采用轉(zhuǎn)染的方法，外源導(dǎo)入pGCsi-U6

4、/Neo/GFP/shCyclinB1，挑選單克隆，用Westernblot方法檢測(cè)CyclinB1蛋白表達(dá)的差異，用RT-PCR方法檢測(cè)CyclinB1mRNA水平，擴(kuò)增后構(gòu)建穩(wěn)定低表達(dá)CyclinB1的細(xì)胞株，同時(shí)建立轉(zhuǎn)染pGCsi-U6/Neo/GFP-Non的細(xì)胞株作為空載對(duì)照。繪制各細(xì)胞株的生長(zhǎng)曲線比較其增殖能力。克隆形成和Transwell實(shí)驗(yàn)分別比較各細(xì)胞株的致瘤性和體外侵襲能力。給予一定濃度紫杉醇處理各細(xì)胞株，比較其生存

5、率；采用細(xì)胞免疫熒光的方法觀察細(xì)胞核形態(tài)的變化；測(cè)定各細(xì)胞株P(guān)ARP蛋白剪切水平，綜合實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較各細(xì)胞株在紫杉醇處理后的凋亡水平。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，兩個(gè)CyclinB1低表達(dá)細(xì)胞株與EC9706、空載細(xì)胞株相比：細(xì)胞生長(zhǎng)速度減慢、增殖能力下降；致瘤性和體外侵襲能力降低。紫杉醇處理后生存率降低，細(xì)胞核形態(tài)發(fā)生凋亡變化的細(xì)胞比例升高。由此可以得出結(jié)論，CyclinB1的低表達(dá)會(huì)抑制食管癌細(xì)胞的增殖，降低食管癌細(xì)胞的致瘤性及侵襲能力，

6、增強(qiáng)化療藥物誘導(dǎo)的食管癌細(xì)胞凋亡，使其對(duì)化療藥敏感性增高。 檢測(cè)紫杉醇作用后各細(xì)胞株CyclinB1蛋白的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)EC9706、空載細(xì)胞株與兩個(gè)低表達(dá)細(xì)胞株的CyclinB1蛋白表達(dá)量均與藥物處理前相比有顯著提高，說(shuō)明藥物可以誘導(dǎo)或促進(jìn)食管癌細(xì)胞CyclinB1蛋白的表達(dá)。文獻(xiàn)報(bào)道，細(xì)胞表達(dá)的CyclinB1蛋白和受藥物誘導(dǎo)而表達(dá)的CyclinB1蛋白在細(xì)胞定位以及出核入核機(jī)制上存在不同。非藥物誘導(dǎo)的CyclinB1蛋白主

7、要位于細(xì)胞質(zhì)，而藥物誘導(dǎo)表達(dá)的CyclinB1蛋白主要集中在細(xì)胞核。CyclinB1蛋白低表達(dá)增強(qiáng)細(xì)胞凋亡的可能機(jī)制是，正常表達(dá)的CyclinB1蛋白存在于細(xì)胞質(zhì)中，促進(jìn)細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞凋亡；藥物誘導(dǎo)的CyclinB1蛋白存在于細(xì)胞核中，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。其中的確切過(guò)程和機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。 CyclinB1蛋白的表達(dá)水平和食管癌細(xì)胞的增殖速度密切相關(guān)，CyclinB1的過(guò)表達(dá)可導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的惡性度增加、增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力。