雷帕霉素治療小鼠百草枯中毒致肺纖維化的作用及機制研究.pdf

1、研究背景:百草枯(paraquat, PQ)是一種被廣泛使用的除草劑。但是，對直接接觸的人類和動物來說，PQ是高度毒性的化合物，意外接觸或自殺口服后將導致極高的死亡率。PQ導致死亡的主要原因是肺纖維化，且現(xiàn)在仍無有效的治療方法。雷帕霉素（Rapamycin, RAPA）是mTOR（mammalian target of rapamycin）的抑制劑。RAPA在細胞內(nèi)與FK506(tacrolimus)結(jié)合蛋白相結(jié)合后形成復合物，此復合物

2、再與mTOR結(jié)合后將抑制信號傳遞至下游效應分子，最終抑制細胞的生長和增殖?，F(xiàn)RAPA治療已廣泛運用于臨床，包括器官移植后的抗免疫排斥治療等。同時，RAPA的抗纖維化作用也日益受到重視。
　　目的:評估RAPA能否明顯抑制小鼠PQ中毒誘導的肺纖維化，并探討此抗纖維化作用的相關(guān)機制。
　　實驗方法:將C57BL/6J雄鼠分為對照組（生理鹽水，10ml/kg，腹腔注射）和實驗組（PQ，10mg/kg，腹腔注射）。實驗組根據(jù)處理不同

3、，再分為以下四組:PQ組（PQ中毒后未治療）、PQ+RAPA組（PQ中毒后每日子RAPA1mg/kg灌胃治療）、PQ+MP組（PQ中毒后予一次甲強龍30mg/kg腹腔注射治療）和PQ+MP+RAPA組（PQ中毒后予一次甲強龍30mg/kg腹腔注射治療以及每日予RAPA1mg/kg灌胃治療）。每日觀察和記錄所有小鼠的體重和生存率變化。PQ中毒后14d時每組小鼠取3只處死，剩下的各組小鼠于28d時全部處死。用H&E(hematoxylin-

4、eosin)和Masson's染色觀察肺組織結(jié)構(gòu)變化。用ELISA試劑盒檢測肺組織中羥脯氨酸(Hydroxyproline，HYP)的含量。用免疫組化和免疫印跡的方法檢測轉(zhuǎn)化生長因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1），α-平滑肌肌動蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）和上皮細胞鈣粘附蛋白（E-cadherin）的表達水平。
　　結(jié)果:PQ誘導肺纖維化的小鼠模

5、型建立成功。小鼠肺組織染色結(jié)果顯示，RAPA治療能減輕肺纖維化的病理改變，包括肺泡結(jié)構(gòu)塌陷和肺間質(zhì)膠原沉積。ELISA實驗結(jié)果顯示，RAPA可降低PQ中毒小鼠肺組織中HYP的含量，且此作用在RAPA治療28d后更為顯著。免疫組化和免疫印跡實驗結(jié)果顯示，RAPA能明顯下調(diào)肺組織中TGF-β1和α-SMA的表達，但不能明顯提高E-cadherin蛋白水平的表達。同時，僅用RAPA治療無法明顯增加中毒小鼠的生存率和體重。甲強龍治療可增加小鼠生