骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)百草枯所致大鼠肺纖維化治療的研究.pdf

1、本文主要分兩部分展開敘述：
　　第一部分：SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離、培養(yǎng)、純化及其生物學(xué)特性鑒定的研究
　　目的：探討SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Bone Marrow-derived Mesenchymal Sstem Cells，BMSCs）體外分離、純化和培養(yǎng)方法，并鑒定其生物學(xué)特性，建立理想的大鼠BMSCs體外分離培養(yǎng)體系，為BMSCs實(shí)驗(yàn)研究應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。
　　方法：取4-6周齡的清潔級(jí)雄性SD大鼠，無(wú)菌條

2、件下分離大鼠下肢，PBS沖洗骨髓腔，收集骨髓。聯(lián)合運(yùn)用密度梯度離心法和全骨髓貼壁培養(yǎng)法分離、純化和培養(yǎng)SD大鼠BMSCs。光鏡下進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察、采用MTT法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線、應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定細(xì)胞表面標(biāo)記，并檢測(cè)BMSCs向成骨、成脂肪細(xì)胞分化的潛能。
　　結(jié)果：顯微鏡下體外分離培養(yǎng)的SD大鼠BMSCs呈梭形、成纖維細(xì)胞樣形態(tài)，大小均一，漩渦狀生長(zhǎng)。細(xì)胞生長(zhǎng)曲線呈“S”形。P3代SD大鼠BMSCs純度達(dá)98％以上；細(xì)胞表面表達(dá)

3、CD44、CD90等抗原分子，不表達(dá)CD34抗原。誘導(dǎo)P3代BMSCs可向成骨細(xì)胞及成脂肪細(xì)胞分化。
　　結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)建立起了一種理想的大鼠BMSCs體外分離培養(yǎng)體系。根據(jù)這種方法培養(yǎng)出的大鼠BMSCs純度高、生物學(xué)特征穩(wěn)定，可用于對(duì)BMSCs的實(shí)驗(yàn)研究。
　　第二部分：BMSCs對(duì)百草枯所致大鼠肺纖維化治療的研究
　　目的：觀察BMSCs在百草枯致大鼠肺纖維化的療效，為臨床百草枯中毒的患者治療提供新的思路。
　

4、　方法：90只雌性SD大鼠隨機(jī)分為3組（各30只），為A組（正常對(duì)照組）、B組（PQ組）、C組（PQ+BMSCs組）。后兩組每只大鼠均腹腔注射百草枯溶液15 mg/k g（無(wú)菌蒸餾水稀釋至1%濃度）。C組于染毒后3h、第3、7天分別行尾靜脈移植2×106個(gè)/只的雄性SD大鼠BMSC懸液1.5 ml。觀察大鼠存活率，并于染毒后14天、21天、28天每組隨機(jī)選取6只大鼠處死，留取血液與肺組織標(biāo)本。測(cè)定肺濕/干（W/D）比值，檢測(cè)血清TGF-

5、β、肺HYP的含量；觀察肺組織病理變化；天狼星紅染色肺組織進(jìn)行肺纖維化程度的觀察并定量分析。
　　結(jié)果：百草枯造模后，14天內(nèi)B組大鼠死亡總共14只，C組死亡4只大鼠。B組與C組的存活率比較有顯著差別（P＜0.05）。取B組肺組織行HE、MASON染色，病理符合肺纖維；在觀察的第14、21和28天， C組比B組出現(xiàn)肺泡炎癥、肺纖維化程度和肺臟結(jié)構(gòu)破壞更輕。天狼星紅染色B組Ⅰ型膠原較A組和C組明顯增多，C組較A組增多。C組肺W/D比

6、較B組顯著減輕（P＜0.05）；A組與C組肺W/D比值無(wú)差別（P=0.315，P＞0.05）。第14、21、28天血清中表達(dá)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（TGF-β）的含量比較中，B組比C組明顯增多（P<0.05）；組間差異有顯著性。第28天C組較B組肺HYP含量降低（P＜0.05），兩組肺HYP含量較A組均升高（P＜0.05）。
　　結(jié)論：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)百草枯誘導(dǎo)大鼠肺纖維化模型的肺纖維化程度具有一定的抑制作用，可提高生存率，可能與其