紫檀芪對百草枯誘導(dǎo)肺纖維化的保護作用及機制.pdf

1、研究背景：百草枯(paraquat，PQ)中毒可導(dǎo)致肺部損傷，該過程可明確劃分為兩個階段:急性肺損傷階段與肺纖維化階段。PQ通過誘導(dǎo)氧化應(yīng)激、炎癥以及纖維反應(yīng)產(chǎn)生毒性。PQ中毒主要機制是氧化還原反應(yīng)和活性氧(reactive oxygen species，ROS)的產(chǎn)生。
　　Sirt1（sirtuin type1）是一種重要的細胞生存蛋白，與氧化應(yīng)激有關(guān)。ROS水平增加可抑制Sirt1活性，這是因為ROS能夠氧化修飾Sirt1半

2、胱氨酸殘基。Sirt1的過表達能夠誘導(dǎo)抗氧化基因表達，進而起到抗氧化應(yīng)激作用。
　　紫檀芪(pterostilbene，PTS)在葡萄、藍莓和紫檀木中被發(fā)現(xiàn)，具有止痛、抗衰老、抗癌、抗炎、抗氧化和抗增殖的藥理作用。
　　本實驗分為兩個部分:第一部分旨在研究Sirt1是否與PQ誘導(dǎo)的急性肺損傷與肺纖維化有關(guān);第二部分旨在研究紫檀芪能否通過抑制ROS的產(chǎn)生和調(diào)節(jié)Sirt1的表達而對PQ誘導(dǎo)的肺部纖維化起到保護作用。
　　方

3、法：第一部分實驗:腹腔注射PQ30 mg/kg，構(gòu)建C57BL/6小鼠（5-8周齡）急性肺損傷模型，實驗分為正常對照組和PQ組。單次注射PQ8h后麻醉動物進行支氣管肺泡灌洗，取支氣管肺泡灌洗液(BALF)檢測灌洗液中細胞總數(shù)、總蛋白濃度，采用ELISA試劑盒檢測BALF中IL-6與TNF-α水平;取肺組織，HE染色觀察組織形態(tài)學(xué)的變化，DHE染色檢測ROS水平，TUNEL染色與Caspase-3活性檢測細胞凋亡狀況，Western Bl

4、ot檢測組織中Sirt1的蛋白表達。腹腔注射PQ20 mg/kg，構(gòu)建C57BL/6小鼠（5-8周齡）肺纖維化模型，實驗分為正常對照組和PQ組。單次注射21天后造模結(jié)束，處理方法及檢測指標同上，并做Masson染色檢測膠原沉積。
　　第二部分實驗:紫檀芪干預(yù)實驗分為正常對照組、模型組、溶媒組、紫檀芪低劑量組（PQ+PTS20 mg/kg）、紫檀芪高劑量組(PQ+PTS40 mg/kg)和紫檀芪組(PTS40 mg/kg)。單次腹腔

5、注射PQ20 mg/kg，隨后每日進行紫檀芪灌胃，連續(xù)灌胃21天，麻醉動物進行支氣管肺泡灌洗并取肺組織，方法及檢測指標與肺纖維化模型相同。
　　結(jié)果：
　　第一部分實驗結(jié)果:
　　1.與正常對照組相比，急性肺損傷小鼠肺組織中出現(xiàn)肺泡間隔增厚、肺泡斷裂和炎性細胞浸潤;肺纖維化小鼠肺組織中無功能的肺纖維組織逐漸代替正常的肺泡組織，肺泡出現(xiàn)萎陷、肺泡間隔增厚、炎性細胞浸潤。Masson染色結(jié)果顯示肺纖維化肺組織出現(xiàn)膠原沉積。

6、
　　2.與正常對照組相比，急性肺損傷與肺纖維化小鼠BALF中細胞總數(shù)增多，總蛋白濃度增加，IL-6與TNF-α水平升高。
　　3.與正常對照組相比，急性肺損傷與肺纖維化小鼠肺組織Caspase-3活性顯著增強，TUNEL染色陽性細胞數(shù)增多。
　　4.與正常對照組相比，急性肺損傷與肺纖維化小鼠肺組織ROS水平升高。
　　5.與正常對照組相比，急性肺損傷與肺纖維化小鼠肺組織Sirt1蛋白表達降低。
　　6.與

7、正常對照組相比，急性肺損傷與肺纖維化小鼠BALF中IL-6與TNF-α水平升高。
　　第二部分實驗結(jié)果:
　　1.與PQ組相比，高劑量紫檀芪能夠減輕PQ對肺泡結(jié)構(gòu)的損傷，同時也減少膠原沉積。
　　2.與PQ組相比，高劑量紫檀芪能顯著減少BALF中細胞總數(shù)和總蛋白濃度。
　　3.與PQ組相比，高劑量紫檀芪可抑制肺組織Caspase-3活性，同時可使肺組織TUNEL染色陽性細胞數(shù)減少。
　　4.與PQ組相比，高