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1、目的:探索經(jīng)G-CSF動員后分離的外周血間充質(zhì)干細胞(MSCs)移植對模型兔頸動脈球囊成形術(shù)后再狹窄的作用及其可能機制。 方法:連續(xù)5天應(yīng)用G-CSF30μg/(kg·d)于兔腹壁皮下注射動員骨髓MSCs,第6天采血,經(jīng)密度梯度離心法結(jié)合貼壁培養(yǎng)法分離、培養(yǎng)兔外周血MSCs,流式細胞儀鑒定,體外擴增,大量凍存?zhèn)溆?;移植前綠色熒光蛋白(GFP)標記。新西蘭大白兔60只隨機分為對照組(N=30)和移植組(N=30),以高脂喂養(yǎng)加氮氣
2、損傷構(gòu)建動脈粥樣硬化血管狹窄模型,模型構(gòu)建成功后實施右頸總動脈球囊血管成形術(shù)。移植組于血管成形術(shù)后立即接受MSCs靜脈移植,對照組接受同體積無血清培養(yǎng)液注射。實驗動物分別于血管成形術(shù)后7、14、28天被處死(n=10),留取損傷血管組織及血標本進行相關(guān)指標測定:結(jié)合計算機病理圖像分析系統(tǒng),Weigert彈力纖維染色法進行血管形態(tài)學分析;免疫組織化學方法測定血管內(nèi)皮化程度及綠色熒光蛋白表達情況、平滑肌細胞凋亡情況;酶聯(lián)免疫免疫吸附法測定血
3、中C反應(yīng)蛋白(CRP)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的水平;同時測定球囊成形術(shù)前后肝、腎功能和心肌酶學變化。 結(jié)果: ①G-CSF動員后可分離出外周血MSCs并能體外大量擴增; ②攜帶GFP基因的腺病毒載體感染MSCs可對其進行有效標記; ③與對照組相比較,移植組血中VEGF明顯增高,血管形態(tài)學檢查顯示移植組血管內(nèi)皮化面積增加,血管內(nèi)膜、中膜厚度及再狹窄率明顯下降; ④移植組有部分內(nèi)皮細胞為GFP
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