聯(lián)合轉(zhuǎn)染VEGF和PCNA-ASODN對實驗兔血管成形術(shù)后再狹窄的影響.pdf

1、目的:探討聯(lián)合轉(zhuǎn)染血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)基因和增殖細胞核抗原反義寡核苷酸(PCNA-ASODN)對實驗大白兔血管成形術(shù)后再狹窄的影響。
　　 方法:挑選健康新西蘭純種大白兔32只,隨機分為四組:對照組、轉(zhuǎn)染VEGF組、轉(zhuǎn)染PCNA-ASODN組和聯(lián)合轉(zhuǎn)染組(聯(lián)合轉(zhuǎn)染VEGF和PCNA-ASODN組)。所有實驗大白兔均采用股-髂動脈球囊損傷術(shù)構(gòu)建血管成形術(shù)后再狹窄動物模型,然后將各轉(zhuǎn)染組以醫(yī)用生物蛋白膠作為緩釋載體,分別用3

2、00μgVEGF或/和PCNA-ASODN均勻噴布于損傷區(qū)血管段外膜。4周后,在光學(xué)顯微鏡下觀察各組血管內(nèi)膜、中層結(jié)構(gòu)和局部血栓形成情況;用電子顯微鏡觀察新生內(nèi)膜內(nèi)皮細胞、內(nèi)膜、中膜,并計算內(nèi)膜/中膜(I/M)面積比和厚度比;采用RT-PCR技術(shù)從mRNA水平檢測VEGF與PCNA基因的表達,采用免疫組化法從蛋白質(zhì)水平檢測VEGF與PCNA的表達。
　　 結(jié)果:①光鏡下對照組管腔面內(nèi)皮細胞大部分缺失,內(nèi)膜增生明顯,增生厚度不一,

3、缺失區(qū)內(nèi)膜增厚更著,中層平滑肌細胞增多,排列紊亂,形態(tài)不一;轉(zhuǎn)染VEGF組和轉(zhuǎn)染PCNA-ASODN組血管內(nèi)皮細胞部分修復(fù),內(nèi)膜增生較輕,中層平滑肌細胞輕度增生;聯(lián)合轉(zhuǎn)染組血管內(nèi)皮較完整、光滑,內(nèi)膜輕度增生,平滑肌細胞排列規(guī)則,外膜未見明顯變化。②電鏡下測定發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)染VEGF組和轉(zhuǎn)染PCNA-ASODN組I/M面積比、I/M厚度比均明顯低于對照組;轉(zhuǎn)染PCNA-ASODN組低于VEGF組,但未達到統(tǒng)計學(xué)差異;聯(lián)合轉(zhuǎn)染組I/M面積比、I/

4、M厚度比均明顯低于轉(zhuǎn)染VEGF組和轉(zhuǎn)染PCNA-ASODN組。③RT-PCR檢測結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染VEGF組的VEGF表達水平明顯高于對照組及轉(zhuǎn)染PCNA-ASODN組;聯(lián)合轉(zhuǎn)染組的VEGF表達明顯高于對照組及轉(zhuǎn)染PCNA-ASODN組;但轉(zhuǎn)染VEGF組與聯(lián)合轉(zhuǎn)染組比較無明顯差異;轉(zhuǎn)染PCNA-ASODN組和聯(lián)合轉(zhuǎn)染組的PCNA表達水平明顯低于對照組及轉(zhuǎn)染VEGF組,但兩組之間差異不顯著。④免疫組化檢測結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染VEGF組及聯(lián)合轉(zhuǎn)染組的