ACE、PAs和TGF-β1對血管成形術后再狹窄作用的實驗研究.pdf

1、目的:①建立大鼠頸動脈再狹窄模型，原位灌注固定取材。評價卡托普利對血管成形術(PTA)后再狹窄的影響，分析卡托普利對血管再狹窄的干預作用。②觀察PTA后不同時間血管壁纖溶酶原激活系統(tǒng)(纖溶系統(tǒng))各因子蛋白及mRNA水平表達的動態(tài)變化特點，分析其與血管各層厚度、面積的關系，探討纖溶系統(tǒng)在血管再狹窄過程中的變化和作用。③觀察PTA后，TGF-β1在蛋白水平及mRNA水平表達的動態(tài)變化特點，分析其與再狹窄的關系，探討TGF-β1在血管再狹窄過

2、程中的作用和意義。 材料和方法:1.動物模型和分組SD雄性大鼠60只，分單純損傷實驗組(單損組)、藥物干預實驗組(干預組)及對照組。單損組采用改良導絲法制作大鼠頸動脈再狹窄模型。干預組將卡托普利研磨成粉狀生理鹽水稀釋配制成5mg/ml溶液，分別于制模前6d開始按10mg/kg/d劑量經灌胃針給予大鼠至術后各時間點。對側頸總動脈作為假手術對照組。每組各時間點6只大鼠，于制模后1天、4天、7天、14天及28天原位灌注固定取材。根據H

3、E染色標本情況，選血管形態(tài)正常、結構完整的50個標本，進行后續(xù)染色及處理。 2.病理學檢查所有標本行HE染色。對uPA、tPA、PAI-1及TGF-β1采用免疫組織化學染色，uPA及TGF-β1同時進行原位雜交染色。 3.病理學資料圖像分析采用病理圖像分析系統(tǒng)對標本HE染色片進行形態(tài)計量分析并分別計數uPA、tPA、PAI-1及TGF-β1免疫組化染色片和uPA及TGF-β1原位雜交染色片內膜、中膜、外膜陽性細胞數。

4、 結果:1.卡托普利對PTA后血管內膜增生和重塑的影響1.1病理改變損傷后第1天可見血管內皮剝脫，局部內彈力板斷裂、掀起，血管中膜變薄，管腔略大，外膜無明顯變化；第4天：除以上改變外，可見少量的平滑肌細胞失去正常形態(tài)，部分血管外膜增厚；第7天：見少量新生內膜形成，中膜、外膜增厚，細胞外基質增加，管腔縮小；第14天：新生內膜進一步增厚，細胞外基質增加顯著，血管外膜完整，外膜厚度變薄，管腔狹窄；第28天：新生內膜明顯增厚，中膜萎縮變薄，

5、外膜厚度基本正常，動脈壁明顯增厚，管腔明顯狹窄。干預組病理改變與單損組基本一致，僅14和28天新生內膜面積明顯減小。 1.2內膜、中膜、外膜厚度的變化新生內膜從第7天開始，厚度逐漸增加，到28天達峰值，中、外膜損傷后厚度無明顯變化。干預組和單損組比較血管壁三層厚度無顯著差別。 1.3血管壁各層面積的變化新生內膜從第7天開始出現，面積逐漸增加，到第28天達峰值。第14、28天干預組和單損組比較新生內膜面積有顯著差別，干預組

6、明顯減低，中、外膜面積無顯著差別。 1.4狹窄率在血管損傷后逐漸增大，到28天達峰值。與單損組比較，干預組在14天和28天狹窄率明顯變小，各時間點內彈力板面積、外彈力板面積及重塑指數兩組之間無顯著差別。 2.血管壁uPA、tPA、PAI-1在血管再狹窄中的表達和意義 2.1uPA在蛋白和mRNA水平的表達 正常血管壁見少量uPA抗原陽性細胞。損傷后第1天，新生內膜尚未形成，中膜和外膜可見少量陽性染色細胞；

7、損傷后第4天，內膜見少量陽性細胞，中膜和外膜陽性細胞增多，以中膜為著；損傷后第7天，新生內膜增厚，其內見大量陽性細胞，中膜和外膜的陽性細胞仍保持在較高水平；損傷后第14天、28天，血管壁各層陽性細胞都有明顯的下降，陽性細胞主要集中在新生內膜，中、外膜陽性細胞回到基線水平。uPA在mRNA水平的變化與抗原水平變化基本一致。干預組與單損組比較，在28天新生內膜、7天中膜uPA蛋白水平表達顯著降低，在14天內膜uPAmRNA表達顯著降低。單損

8、組內、中、外膜uPA抗原和mRNA表達與各自內、中、外膜面積及厚度無顯著相關。 2.2tPA在蛋白水平的表達正常血管壁見少量tPA蛋白表達。損傷后第1天，中膜和外膜可見少量陽性染色細胞；損傷后第4天，內膜見少量陽性細胞，中外膜陽性細胞增多；第7天，新生內膜表達達峰值，中外膜陽性細胞保持在較高水平；損傷后第14天、28天，血管壁各層陽性細胞都有不同程度下降，新生內膜仍維持較高水平表達。干預組與單損組比較，tPA蛋白水平表達趨勢基本

9、一致。相關性分析表明，單損組內膜tPA抗原表達與內膜面積正相關，而外膜、中膜tPA抗原表達與外膜、中膜面積無顯著相關，內膜、中膜tPA抗原表達與內膜、中膜厚度有相關性，而外膜表達與外膜厚度無顯著相關性。 2.3PAI-1在蛋白水平的表達正常血管壁內膜、中膜見少量陽性細胞，外膜未見陽性細胞。損傷后第1天，內膜損傷，中膜可見少量陽性細胞，外膜未見陽性細胞；損傷后第4天，內膜、外膜見少量陽性細胞，中膜陽性細胞明顯增多；損傷后第7天，新

10、生內膜表達達峰值，見較多陽性細胞，中膜陽性細胞明顯減少，外膜仍有少量表達；損傷后第14天、28天，血管壁各層陽性細胞有不同程度下降，新生內膜仍維持較高水平表達，外膜基本見不到陽性細胞。干預組與單損組比較，除干預組14、28天內膜、第4天中膜陽性細胞表達顯著下降外，其余各組無顯著差別。相關性分析表明，單損組內、中、外膜PAI-1抗原表達與內、中、外膜面積及厚度無顯著相關性。單損組中膜uPA抗原與中膜PAI-1抗原表達、內、中、外膜tPA抗

11、原與內、中、外膜PAI-1抗原表達有相關性，而內、外膜uPA抗原與內、外膜PAI-1抗原表達無明顯相關。 3.TGF-β1在血管再狹窄中的表達和意義3.1單損組TGF-β1mRNA在血管壁各層的表達對照組內膜無TGF-β1mRNA陽性細胞表達，中、外膜有少量表達。血管損傷后4天，內膜仍無TGF-β1mRNA陽性細胞表達，中、外膜陽性細胞數增加；損傷后7天內膜見少量陽性細胞，中膜陽性細胞達峰值，外膜陽性細胞減少；損傷后14天和28

12、天，內膜陽性細胞數增加并于28天達峰值，中膜陽性細胞數明顯下降，外膜表達稍有波動，但與對照組比較無顯著差別。干預組和單損組TGF-β1mRNA在血管壁各層表達趨勢基本一致，除干預組內膜在28天陽性細胞數明顯下降外，其余各時間點兩組比較無顯著差別。相關性分析結果表明，TGF-β1mRNA在血管壁各層表達與血管內、中、外膜面積及厚度無顯著相關性。 3.2單損組TGF-β1蛋白在血管壁各層的表達損傷血管各層TGF-β1蛋白表達均較低，

13、可能與標本處理過程中抗原破壞或丟失有關。 結論:1.卡托普利減小大鼠頸動脈損傷后新生內膜面積及狹窄率，抑制新生內膜形成，但不改變內、外彈力板面積及重塑指數，不影響血管收縮性重塑。2.uPA、tPA、PAI-1抗原和uPAmRNA表達增加與新生內膜的形成相伴隨，證實它們參與再狹窄的形成；內膜尚未形成時uPA抗原和mRNA表達以中膜為主，內膜形成后，表達主要集中在新生內膜，可能與早中期增殖細胞向內膜遷移形成新生內膜形成有關；tPA抗