血管內(nèi)皮抑制素治療子宮內(nèi)膜異位癥的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景與目的： 子宮內(nèi)膜異位癥(Endometriosis，EM)是一種婦科常見病，這種疾病雖然屬于良性疾病，但具有惡性腫瘤的特性，如增生、浸潤(rùn)、復(fù)發(fā)等惡性生物學(xué)行為。有多種方法可以治療子宮內(nèi)膜異位癥，但結(jié)果卻并不滿意，無(wú)論經(jīng)過(guò)何種治療，除非根治性手術(shù)，其5年以內(nèi)的復(fù)發(fā)率都在40％以上。目前該病確切的發(fā)病原因尚不完全清楚，研究表明，子宮內(nèi)膜碎片(腺上皮及間質(zhì)細(xì)胞)必須通過(guò)黏附、侵襲和血管形成，方可以生存、生長(zhǎng)，并引起病變和癥狀，這

2、一過(guò)程中新生血管的建立是子宮內(nèi)膜種植成活并發(fā)展成為EM的關(guān)鍵，近年來(lái)多項(xiàng)研究提示多種細(xì)胞因子在這一過(guò)程中起作用，其中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(Vascularendutelial growth factor， VEGF)的作用最為明顯，這些有血管形成活性的生長(zhǎng)因子對(duì)刺激異位灶及其周圍的新生血管的形成有重要作用，用血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子抑制素對(duì)抗VEGF或許可以阻斷這一過(guò)程，因此我們推測(cè)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子抑制素對(duì)EM可能有治療作用。目前重組人血管內(nèi)皮抑制

3、素(恩度Endostatin，ES)己在中國(guó)上市，用于惡性腫瘤的治療，主要通過(guò)抑制血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的作用抑制腫瘤生長(zhǎng)，我們推測(cè)該藥對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥可能有相似治療作用。由此我們將人的子宮內(nèi)膜組織種植于裸鼠腹部皮下，建立子宮內(nèi)膜異癥的動(dòng)物模型，局部注射血管內(nèi)皮抑制素，以探討血管內(nèi)皮抑制素對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥的治療作用。 研究方法： (一)首先建立子宮內(nèi)膜異位癥的裸鼠動(dòng)物模型：取因婦科良性疾病切除子宮的人體子宮內(nèi)膜組織，種植于3-

4、4周齡雌性裸鼠的腹部皮下，種植后，立即給予苯甲酸雌二醇2mg/kg腿部肌內(nèi)注射，并按每5天1次方式連續(xù)注射。4周后，處死裸鼠，肉眼觀察皮下病灶的大小、血管生長(zhǎng)情況，并取移植物病灶，分別做HE染色病理切片檢查及免疫組織化學(xué)染色，鼠抗人單克隆抗角蛋白抗體，鼠抗人單克隆抗ki-67抗體及CD34標(biāo)記的微血管密度(microvascular density,MVD)檢測(cè)，了解建模是否成功。 (二)分組實(shí)驗(yàn)：按上述方法建立子宮內(nèi)膜異位癥裸

5、鼠模型，于種植手術(shù)后第六天，將裸鼠分成二組：①生理鹽水組對(duì)照組(NS組)：移植物病灶處局部注射生理鹽水0.05ml，隔日一次，共10次；②實(shí)驗(yàn)組即內(nèi)皮抑素組(恩度組，簡(jiǎn)稱ES組)：移植物病灶處局部注射血管內(nèi)皮抑制素(恩度)2.5mg/kg(稀釋成0.05ml)，隔日一次共10次。4周后，處死裸鼠，肉眼觀察皮下病灶的大小、血管生長(zhǎng)情況，并取移植物病灶，分別做HE染色病理切片檢查及免疫組織化學(xué)染色，鼠抗人單克隆抗角蛋白抗體，鼠抗人單克隆抗K

6、i-67抗體及CD34標(biāo)記的微血管密度檢測(cè)，了解ES對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥有無(wú)抑制作用。 結(jié)果： 1、建模結(jié)果： 12只建模裸鼠全部成活，腹部皮下可見黃豆大小的移植物病灶，與裸鼠肌肉組織融合，呈隆起透亮的小囊狀，表面可見血管，HE染色顯微鏡下可見明顯的腺體和間質(zhì)，層次分明，結(jié)構(gòu)整齊，病理證實(shí)為人體子宮內(nèi)膜腺體和間質(zhì)，免疫組化檢查見腺上皮細(xì)胞角蛋白染色陽(yáng)性，基質(zhì)細(xì)胞染色陰性，腺上皮細(xì)胞ki-67染色陽(yáng)性率為17.68％，CD34

7、標(biāo)記的微血管密度為18.35±4.5。 2、分組實(shí)驗(yàn)結(jié)果：生理鹽水組成活12只，其中11只皮下可見3-5mm大小不等的移植物病灶，與裸鼠肌肉組織融合，呈隆起透亮的小囊狀，表面可見血管增生，HE染色顯微鏡下可見明顯的腺體和間質(zhì)，層次分明，結(jié)構(gòu)整齊，病理證實(shí)為人體子宮內(nèi)膜腺體和間質(zhì)，免疫組化檢查見腺上皮細(xì)胞角蛋白陽(yáng)性，基質(zhì)細(xì)胞染色陰性，腺上皮細(xì)胞ki-67染色陽(yáng)性細(xì)胞率為18.48％，CD34標(biāo)記的微血管密度為19.60±5.8，結(jié)

8、果與模型組相似；實(shí)驗(yàn)組(ES組)成活11只，其中10只腹部皮下可見3-5mm大小不等的移植物病灶，病灶大小與NS組無(wú)明顯差異(P＞0.05)，但呈結(jié)節(jié)狀，質(zhì)地偏硬，色白，表面無(wú)明顯血管增生，HE染色顯微鏡下可見明顯的腺體和間質(zhì)，病理證實(shí)為人體子宮內(nèi)膜腺體和間質(zhì)，但腺體結(jié)構(gòu)紊亂，部分腺上皮細(xì)胞萎縮，免疫組化檢查腺上皮細(xì)胞ki-67染色陽(yáng)性細(xì)胞率為3.6％，顯著低于NS組(P＜0.01)，CD34標(biāo)記的微血管密度為7.28±3.6，低于NS