PAMAM介導內皮抑素基因治療裸鼠人子宮內膜異位癥模型的實驗研究.pdf

1、目的：通過比較皮下移植及皮下注射兩種不同的方法建立裸鼠人子宮內膜異位癥模型，為研究EMs提供更好的建模方式。進一步借助裸鼠人EMs模型，進行PAMAM介導ES基因治療，比較不同時間點用藥對異位病灶的抑制作用及其副作用，為國內外該領域的研究提供重要的實驗資料。 方法：取自子宮腺肌癥患者，年齡為42-47歲，行全子宮切除后刮取子宮內膜，分別以皮下移植內膜塊和皮下注射內膜碎屑的方法建立裸鼠人子宮內膜模型，自術后第三天起，每隔三日用游標

2、卡尺測量異位病灶長、寬，按公式計算病灶體積。建模后2周，4周脫頸椎處死裸鼠，取病灶行HE染色，VEGF及FⅧ檢測；取自子宮肌瘤患者，年齡為42-49歲，行全宮切除后刮取內膜，以皮下移植內膜塊的方法建立裸鼠人子宮內膜模型，首先隨機分為Ⅰ組，即建模后第1天病灶局部注射PAMAM介導ES基因20ug治療一次和Ⅱ組，即建模后第14天病灶局部注射PAMAM介導ES基因20ug治療一次。然后每組又分為ES轉染組、PAMAM組、生理鹽水組及空白組四個

3、亞組。每日觀察裸鼠的精神，活動及大小便情況，每隔三日用游標卡尺測量異位病灶長、寬，按公式計算病灶體積。給藥后1周脫頸椎處死裸鼠。通過病灶稱重，并且行HE染色，ES、VEGF、FⅧ檢測對療效進行評估。通過對裸鼠心臟，肝臟，腎臟進行大體觀察及HE染色，裸鼠卵巢、子宮稱重、HE染色，卵泡計數(shù)進行副作用評估。 結果：⑴測量病灶體積變化及生長曲線：移植組病灶體積隨著時間的推移逐漸增大，種植后2周左右達到高峰，以后緩慢縮小至平臺期；注射組體

4、積呈下降趨勢，種植后2周至平臺期。在相同時間點(2周或4周)，兩組異位病灶體積相比差別無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，而兩組異位病灶重量相比有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。⑵病灶成活率比較，在相同時間點(2周或4周)，兩組異位病灶成活率和裸鼠累積存活率相比差別無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。⑶移植組和注射組，2周時病灶腺體中VEGF表達明顯增高，與4周時比較有顯著性差異(P<0.05)，MVD明顯增多，與4周時比較有顯著性差異(P<0.05)

5、。而2周和4周時，移植組病灶腺體和間質中VEGF表達、MVD與注射組比較差別無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。⑷免疫組化SP法測定轉染后四組異位病灶組織中ES、VEGF以及MVD的表達。(1)在Ⅰ組中，ES轉染組腺體中ES表達明顯增高，與三對照組比較均有顯著性差異(P<0.05)，三對照組之間比較無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；ES轉染組病灶腺體和間質中VEGF的表達與三對照組比較無統(tǒng)計學意義((P>0.05)，三對照組之間比較無統(tǒng)計學意義(

6、P>0.05)；ES轉染組MVD與三對照組比較無統(tǒng)計學意義((P>0.05)，三對照組之間比較無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。(2)在Ⅱ組中，ES轉染組腺體中ES表達明顯增高，與三對照組比較均有顯著性差異(P<0.05)，三對照組之間比較無統(tǒng)計學意義(P>0.05)：ES轉染組病灶腺體和間質中VEGF的表達明顯減少，與三對照組比較均有顯著性差異(P<0.05)，三對照組之間比較無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；ES轉染組MVD明顯減少，與三對

7、照組比較均有顯著性差異(P<0.05)，三對照組之間比較無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。(3)在Ⅱ組中ES轉染組異位病灶中VEGF表達下降，MVD減少與Ⅰ組相比差別具有統(tǒng)計學意義。⑸測量異位病灶體積、重量變化，(1)在Ⅰ組中，ES轉染組病灶體積、重量改變與三對照組比較無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；(2)在Ⅱ組中，ES轉染組異位病灶體積明顯縮小，重量明顯減輕，與三對照組比較均有顯著性差異(P<0.05)，三對照組之間病灶體積、重量比較無統(tǒng)計

8、學意義。⑹Ⅰ組和Ⅱ組中，ES轉染組與其他三對照組比較，病理檢查心臟、肝臟、腎臟、卵巢及子宮未見組織形態(tài)改變。ES轉染組內生殖器重量和卵巢卵泡計數(shù)與三對照組比較無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 結論：①皮下移植法和皮下注射法進行人子宮內膜碎屑種植均可成功建立裸鼠人子宮內膜異位癥模型，以皮下移植法病灶形成完整，便于體外觀察。②PAMAM介導pcDNA3.1(+)—hES20ug在移植后兩周病灶局部用藥對裸鼠人子宮內膜異位癥模型具有治療