姜黃素Ⅲ對A549裸鼠移植瘤生長及血管生成的影響.pdf

1、肺癌系世界上發(fā)病率及死亡率較高的惡性腫瘤之一,其中約80﹪為非小細(xì)胞肺癌,而肺腺癌的發(fā)病率更是日益增高.研究表明,血管生成與惡性腫瘤的生長及轉(zhuǎn)移密切相關(guān),相應(yīng)血管的新生是惡性腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的先決條件,腫瘤細(xì)胞不僅由此從宿主中獲得豐富的營養(yǎng),而且還通過腫瘤血管轉(zhuǎn)移.因此抑制腫瘤血管的新生,阻抑腫瘤生長和轉(zhuǎn)移所依賴的血管生成已成為當(dāng)前抗腫瘤尤其是耐藥腫瘤治療的重要策略.近年來血管生成抑制劑的研究倍受腫瘤學(xué)家的重視,國外已有至少35種血管生成

2、抑制劑進(jìn)入臨床研究階段.但目前國內(nèi)的血管生成和抗血管生成研究還遠(yuǎn)不深入.姜黃是中國的傳統(tǒng)中藥,屬姜黃屬植物,研究發(fā)現(xiàn),其主要活性成分姜黃色素可影響腫瘤發(fā)生、發(fā)展的各個(gè)階段(始發(fā)、促進(jìn)和演進(jìn)),作為一種具有良好發(fā)展前景的抗癌藥物,姜黃色素在腫瘤預(yù)防和治療方面的作用已引起了國內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注,成為研究的熱點(diǎn).研究表明,姜黃色素可能通過癌化學(xué)預(yù)防作用、抗腫瘤細(xì)胞增殖作用、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡作用以及抑制血管生成作用等方式發(fā)揮其抗腫瘤活性.姜黃色

3、素主要含有三種主要成分:姜黃素Ⅰ(77﹪);姜黃素Ⅱ,即脫甲氧基姜黃素(17﹪);姜黃素Ⅲ,即雙脫甲氧基姜黃素(3﹪).有研究報(bào)道姜黃素Ⅲ的抗腫瘤活性最強(qiáng),其次為姜黃素Ⅱ及姜黃素Ⅰ.由于姜黃素Ⅲ含量較少,不易分離及提純,因而目前對姜黃色素的研究絕大多數(shù)是以姜黃色素的混合物或姜黃素Ⅰ為對象.目前尚未發(fā)現(xiàn)有關(guān)姜黃素Ⅲ抗腫瘤血管生成作用體內(nèi)實(shí)驗(yàn)方面的研究報(bào)道.該課題采用自行分離、提純的姜黃素Ⅲ,主要研究姜黃素Ⅲ體內(nèi)抑制人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549裸

4、鼠移植瘤生長及其抗腫瘤血管生成作用,并初步探討其作用機(jī)制,為進(jìn)一步將其開發(fā)成為具有臨床應(yīng)用價(jià)值的血管生成抑制劑提供一定的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù);同時(shí)觀察姜黃素Ⅲ與傳統(tǒng)化療藥順鉑聯(lián)用對抑制裸鼠移植瘤生長有無增效作用,為臨床上血管生成抑制劑與常規(guī)化療藥聯(lián)用治療腫瘤提供一定的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù),進(jìn)一步豐富腫瘤包括肺癌綜合治療的內(nèi)容.方法:1.采用醇滲石油醚脫脂、硅膠G柱層析、丙酮純化方法及途徑從中藥姜黃中提取姜黃素Ⅲ單體,并采用高效液相色譜法測定其純度;

5、2.培養(yǎng)人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549,建立裸鼠移植瘤模型;3.將成瘤裸鼠隨機(jī)分成5組:陰性對照組、TNP-470組、姜黃素Ⅲ組、順鉑組、姜黃素Ⅲ+順鉑組,觀察姜黃素Ⅲ及其與順鉑聯(lián)用對人肺腺癌裸鼠移植瘤生長的影響;4.采用組織學(xué)技術(shù),觀察移植瘤結(jié)構(gòu);5.采用免疫組織化學(xué)技術(shù),觀察各實(shí)驗(yàn)組移植瘤CD34、VEGF、VEGFR-1、VEGFR-2的表達(dá)情況;采用ELISA法檢測各實(shí)驗(yàn)組血清中VEGF的含量.結(jié)果: 1.成功從姜黃中分離出姜黃素Ⅲ,純

6、化后經(jīng)高效液相色譜法測定其純度達(dá)95.2﹪;2.姜黃素Ⅲ組人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549裸鼠移植瘤瘤重及體積分別為0.57±0.10g和699.40±118.03mm<'3>,顯著低于陰性對照組(1.15±0.18g及1413.4±266.33mm<'3>,p<0.01);3.姜黃素Ⅲ組MVD為40.13±7.05,顯著低于陰性對照組(76.67±10.48,p<0.01),但與TNP-470組相比無顯著差異(37.53±6.80,p>0.05

7、);4.免疫組化結(jié)果顯示,姜黃素Ⅲ組VEGF及其受體VEGFR-1、VEGFR-2表達(dá)的陽性組織RGV值分別為1.63±0.13、1.47±0.12、1.48±0.15,顯著低于陰性對照組(分別為2.49±0.15、1.78±0.12、2.27±0.18,p<0.01);同時(shí),ELISA檢測結(jié)果顯示,姜黃素Ⅲ組血清中VEGF含量為65.18±11.62 pg/ml,顯著低于陰性對照組(100.52±13.17pg/ml,p<0.01);

8、5.順鉑組對人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549裸鼠移植瘤MVD、VEGF及其受體VEGFR-1、VEGFR-2的表達(dá)無明顯影響;6.姜黃素Ⅲ和順鉑聯(lián)合治療組人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549裸鼠移植瘤體積及瘤重分別為0.24±0.05g、354.72±123.72mm<'3>,均顯著低于姜黃素Ⅲ及順鉑單藥治療組(p<0.01),q值為1.00.結(jié)論:1.采用醇滲石油醚脫脂、硅膠G柱層析、丙酮純化方法及途徑提取姜黃素Ⅲ單體效果較好,且操作簡單;2.姜黃素Ⅲ能明顯