PPARγ配基羅格列酮抗胃癌裸鼠移植瘤血管生成的研究.pdf

1、目的:研究PPARγ激動(dòng)劑羅格列酮及其增敏劑維甲酸對(duì)人胃低分化粘液癌MGC-803細(xì)胞的裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)及血管生成的影響，并初步探討其抗血管生成的可能機(jī)制?！　》椒?首先培養(yǎng)胃癌MGC-803細(xì)胞并將其收集后接種到裸鼠背部皮下(接種前裸鼠稱(chēng)重)，術(shù)后兩周觀(guān)察接種后裸鼠的成瘤情況，篩選成瘤裸鼠。將成瘤的裸鼠分為九組，分別為：未種瘤組(A組)、荷瘤未用藥組(B組)、陽(yáng)性對(duì)照組(絲裂霉素2.5mg/kg/2dC組)、高劑量單獨(dú)用藥組(羅格列

2、酮100mg/kg/2dD1組)、中劑量單獨(dú)用藥組(羅格列酮50mg/kg/2dD2組)、低劑量單獨(dú)用藥組羅格列酮25mg/kg/2dD3組)、高劑量聯(lián)合用藥組(羅格列酮50mg+維甲酸11mg/kg/2dE1組)、中劑量聯(lián)合用藥組(羅格列酮30mg+維甲酸11mg/kg/2dE2組)、低劑量聯(lián)合用藥組(羅格列酮18mg+維甲酸11mgE3組)。其中每組4只，待移植瘤長(zhǎng)至大小約100mm3時(shí)開(kāi)始分別給每組裸鼠灌胃給藥(均為每?jī)扇找淮?，

3、其中C組腹腔注射給藥，A組自由進(jìn)食進(jìn)水，B組給予生理鹽水灌胃，每隔5日分別測(cè)量每只裸鼠移植瘤的大小并給裸鼠稱(chēng)重，并據(jù)此繪制移植瘤的生長(zhǎng)曲線(xiàn)。40日后，處死裸鼠，解剖顯微鏡下檢測(cè)各組移植瘤的大小，并稱(chēng)重，計(jì)算抑瘤率；取外周血檢測(cè)各組裸鼠的血常規(guī)、肝功能、腎功能、血糖等指標(biāo)，評(píng)價(jià)藥物的毒副作用；HE染色觀(guān)察腫瘤血管生成情況及有無(wú)轉(zhuǎn)移；免疫組化分別檢測(cè)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)、CD34的表達(dá)，計(jì)算微血管

4、密度計(jì)數(shù)(MVD)差異；逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測(cè)VEGF及HIF-1α的mRNA表達(dá)差異。　　結(jié)果:1.裸鼠體重：處死前裸鼠體重，B組與與其他各組間的體重差別有顯著性意義(p＜0.01)；各用藥組間、A組與各用藥組的體重差別無(wú)顯著性意義(p＞0.05)?！　?.用藥后對(duì)移植瘤體積的影響：B組與各用藥組間，C組、D3組、E3組與其他用藥組瘤體積差別有顯著意義(p＜0.05)；C與D3組、E3組間及其他用藥組間瘤體積差

5、別無(wú)顯著意義(p＞0.05)。　　3.形態(tài)學(xué)觀(guān)察各組血管生成情況：(1)HE染色發(fā)現(xiàn)B組的癌細(xì)胞最豐富，血管數(shù)最多，其次是C組、D3組與E3組，其他用藥組的血管生成較少；(2)免疫組化用CD34標(biāo)記的MVD顯示B組血管數(shù)最多，與其他各組比較有顯著差異(p＜0.01)；C組、D3組與E3組的血管計(jì)數(shù)其次，與其他各用藥組之間比較有顯著差異(p＜0.05)；D1、D2組和E1、E2組的血管計(jì)數(shù)最少?！　?.VEGF、HIF-1α蛋白的表達(dá)

6、：免疫組化顯示B組的VEGF、HIF-1α表達(dá)較多，與其他各組比較有顯著差異(p＜0.01)；C組、D3組與E3組的表達(dá)其次，與其他各用藥組的灰度值比較也有顯著差異(p＜0.05)；D1組、D2組和E1組、E2組的表達(dá)最少。　　5.VEGF、HIF-1α的mRNA表達(dá)情況：RT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)B組VEGF、HIF-1α的mRNA相對(duì)量表達(dá)最高，與其他各組之間差別有顯著意義(p＜0.01)；C組、D3組與E3組的表達(dá)次之，與其他各用藥組

7、比較有明顯差別(p＜0.05)；D1組、D2組和E1組、E2組的mRNA相對(duì)量表達(dá)最低。 結(jié)論: 1、最小濃度為25mg/kg/2d的羅格列酮能縮小瘤體體積，并隨著用藥濃度的增加，抑瘤率也增加，呈劑量依賴(lài)關(guān)系?！　?、維甲酸與羅格列酮合用(最小濃度為ATRA11mg+ROS18mg/kg/2d)可減少羅格列酮的用量而達(dá)到相似的抑瘤效果，可能與維甲酸的增敏作用有關(guān)?！　?、單用羅格列酮及羅格列酮與維甲酸聯(lián)用均可抑制VE