選擇性COX-2抑制劑對(duì)人喉鱗癌Hep-2細(xì)胞裸鼠移植癌血管生成的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的:原發(fā)性喉癌指原發(fā)部位在喉部的腫瘤，以鱗狀細(xì)胞癌(90％)最為常見。喉癌治療包括手術(shù)、放療和化療等多種治療方法。根據(jù)病情的分期可選擇一種，或多種方法相結(jié)合的治療方式。環(huán)氧化酶-2(Cyclooxygenase-2，COX-2)，是催化花生四烯酸合成前列腺素(Prostaglandin，PG)過(guò)程中的關(guān)鍵酶，在體內(nèi)存在COX-1和COX-2兩種同工酶。近年來(lái)大量研究表明COX-2在多種腫瘤中都存在異常增高表達(dá)，在其發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮著重要

2、作用。關(guān)于COX-2在腫瘤中的作用機(jī)制，目前研究表明其可以通過(guò)多種途徑作用于腫瘤發(fā)病過(guò)程。前期實(shí)驗(yàn)[1]已經(jīng)證實(shí)選擇性COX-2抑制劑尼美舒利(nimesulide，NIM)可以通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，抑制細(xì)胞增殖的途徑抑制人喉鱗癌Hep-2細(xì)胞裸鼠移植瘤生長(zhǎng)。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步就NIM對(duì)喉鱗癌Hep-2細(xì)胞裸鼠移植瘤微血管密度(Microvessel density，MVD)、COX-2、血管生成因子-2(Angiopoietin-2，Ang-2

3、)和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basic fibroblastgrowth factor, bFGF)表達(dá)的影響進(jìn)行觀察和研究，以期進(jìn)一步為NIM用于喉鱗癌的治療提供理論依據(jù)。
　　 方法:粱灼萍[1]等在前期試驗(yàn)中，將喉鱗癌Hep-2細(xì)胞接種于裸鼠背部皮下，建立移植瘤模型。將裸鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組各六只，實(shí)驗(yàn)組予裸鼠腹腔注射NIM(50mg/kg/2d，0.2ml);對(duì)照組予裸鼠腹腔注射0.2ml生理鹽水。用藥4周后，處死裸

4、鼠并獲得瘤體。本實(shí)驗(yàn)選用粱灼萍實(shí)驗(yàn)所獲得的喉癌Hep-2細(xì)胞裸鼠移植瘤，運(yùn)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)CD31在喉癌裸鼠移植瘤組織中表達(dá)來(lái)定位瘤體中的MVD，運(yùn)用圖像分析系統(tǒng)作平均光密度值測(cè)定，并比較兩組間的差異;分別采用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)檢測(cè)喉癌裸鼠移植瘤組織中COX-2、Ang-2和bFGF蛋白的表達(dá)情況，運(yùn)用圖像分析系統(tǒng)計(jì)算平均光密度值并比較實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組中COX-2、Ang-2、bFGF蛋白表達(dá)情況;采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(rev

5、erse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR)方法檢測(cè)喉癌移植瘤組織中COX-2，Ang-2和bFGF mRNA的表達(dá)，并對(duì)兩組移植瘤組織中COX-2、Ang-2和bFGF mRNA灰度值進(jìn)行比較;運(yùn)用直線相關(guān)分別分析實(shí)驗(yàn)組中COX-2、Ang-2、bFGF蛋白表達(dá)水平與MVD值的相關(guān)性。
　　 結(jié)果:(1)免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)裸鼠移植瘤中CD31表達(dá)得到平均MVD值，

6、實(shí)驗(yàn)組為12.83±3.06，與對(duì)照組25.50±4.85(t=-5.412，P＜0.05)相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明選擇性COX-2抑制劑NIM干預(yù)后移植瘤內(nèi)血管生成減少;(2)利用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)裸鼠移植瘤組織中COX-2、Ang-2、bFGF蛋白表達(dá)，實(shí)驗(yàn)組中COX-2蛋白表達(dá)光密度為(38.12+15.56)，與對(duì)照組(140.92±23.12)比較顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-9.825，P＜0.05)，實(shí)驗(yàn)組Ang-2

7、蛋白表達(dá)為(49.02±7.67)，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析與對(duì)照組(110.04±6.76)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-14.607，P＜0.05);實(shí)驗(yàn)組bFGF蛋白表達(dá)為(62.25±7.50)，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析與對(duì)照組(119.04±17.30)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-7.391，P＜0.05);(3)運(yùn)用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)移植瘤中COX-2、Ang-2和bFGF mRNA表達(dá)，NIM治療組COX-2 mRNA表達(dá)為(0.70±0.18)

8、，對(duì)照組為(2.20±0.38)，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-9.825，P＜0.05); NIM治療組Ang-2 mRNA灰度值為(0.49±0.03)，對(duì)照組為(0.98±0.10)，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-11.509，P＜0.05); NIM治療組移植瘤中bFGFmRNA表達(dá)為(0.65±0.08)，對(duì)照組為(1.19±0.19)，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-6.209，P＜0.05)。(4)相關(guān)性分

9、析:運(yùn)用直線相關(guān)分析方法分別檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組移植瘤組織中COX-2、Ang-2、bFGF蛋白表達(dá)水平與MVD相關(guān)性，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析存在相關(guān)性，其相關(guān)系數(shù)r分別為0.832，0.944，0.844（P均＜0.05）。
　　 結(jié)論:(1)選擇性COX-2抑制劑NIM可以抑制人喉鱗癌Hep-2細(xì)胞裸鼠移植瘤中血管生成;(2)實(shí)驗(yàn)組中COX-2、Ang-2、bFGF蛋白表達(dá)水平分別與MVD表達(dá)水平呈正相關(guān)，后兩者為血管生成促進(jìn)因子，其與MVD的