Beclin1對喉鱗癌細胞Hep-2紫杉醇敏感性影響的體外研究.pdf

1、目的：
　　喉鱗狀細胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma，LSCC)是常見的頭頸部惡性腫瘤之一。目前臨床上對喉癌的治療多采用手術(shù)結(jié)合放化療的綜合治療方案，化療耐藥影響了喉癌的治療效果。自噬性細胞死亡是Ⅱ型程序性細胞死亡，其不同于凋亡，不依賴caspase。Beclin1是一種自噬調(diào)節(jié)基因，通過與P13K形成復(fù)合物促進自噬，在自噬初級階段有重要作用。已有研究證實Beclin1能停滯細胞周期并參與調(diào)

2、節(jié)細胞凋亡。因此本研究我們檢測不同Beclin1表達水平對喉癌細胞紫杉醇敏感性的影響。
　　方法：
　　本研究利用以喉癌細胞株Hep-2、穩(wěn)定轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-Beclin1質(zhì)粒的喉癌細胞株Hep-2-Beclin1、穩(wěn)定轉(zhuǎn)染pcDNA3.1質(zhì)粒載體的喉癌細胞株Hep-2-pcDNA3.1為研究對象，對三組細胞施加不同濃度的化療藥物紫杉醇（1μg/L、2μg/L、5μg/L、10μg/L、20μg/L）干預(yù)24小時，利用

3、MTT法及流式細胞術(shù)檢測紫杉醇對三組細胞增殖和凋亡的影響。利用western blot檢測三組細胞Akt和p-Akt蛋白表達水平。
　　結(jié)果：
　　不同濃度的紫杉醇處理后的三組喉癌細胞與藥物終濃度正相關(guān)地出現(xiàn)生長抑制率提高。當紫杉醇濃度大于5μg/L時，紫杉醇對Hep-2-Beclin1的生長抑制率高于對另兩株細胞的生長抑制率。以終濃度為10μg/L、20μg/L的紫杉醇處理三株喉癌細胞24小時后，流式細胞術(shù)檢測結(jié)果顯示:1

4、0μg/L紫杉醇處理Hep-2、Hep-2-pcDNA3.1、Hep-2-Beclin1細胞的凋亡率分別為:23.75％±3.77％，21.25％±4.92％，20μg/L，32.50％±5.97％;20μg/L紫杉醇處理Hep-2、Hep-2-pcDNA3.1、Hep-2-Beclin1細胞的凋亡率分別為:38.75％±4.79％、38.75％±6.55％、50.00％±7.26％。各組細胞20μg/L紫杉醇處理后細胞的凋亡率均高于1

5、0μg/L紫杉醇處理后細胞的凋亡率(P＜0.05)。紫杉醇處理后Hep-2-Beclin1組細胞凋亡率均高于Hep-2組和Hep-2-pcDNA3.1組(P＜0.05)。Western blot結(jié)果顯示:Hep-2、Hep-2-pcDNA3.1、Hep-2-Beclin1細胞Akt相對蛋白表達量分別為:1.24±0.03、1.25±0.05、1.27±0.09，三組細胞間Akt相對蛋白表達量無統(tǒng)計學差異(P＞0.05);Hep-2、He