TRAIL在HepG2細(xì)胞表達(dá)及細(xì)胞凋亡機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　把攜帶TRAIL基因的慢病毒載體構(gòu)建在HepG2細(xì)胞中表達(dá)，檢測(cè)TRAIL對(duì)HepG2的蛋白表達(dá)及增殖，觀察TRAIL-HepG2細(xì)胞與化療藥物聯(lián)用效果，并探討其可能凋亡機(jī)制
　　方法：
　　1、肝癌細(xì)胞株HepG2細(xì)胞培養(yǎng)。
　　2、構(gòu)建TRAIL重組慢病毒表達(dá)載體pCDH-CMV-TRAIL-EF1-GFP-T2A-Puro。
　　3、慢病毒感染肝癌細(xì)胞HepG2的 TRAIL蛋白表達(dá)

2、>　　3、化療藥物干預(yù)TRAIL-HepG2細(xì)胞。
　　4、MTT檢測(cè)細(xì)胞抑制率。
　　5、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期。
　　結(jié)果：
　　測(cè)序證實(shí)成功構(gòu)建攜帶TRAIL基因慢病毒載體，當(dāng)MOI=40時(shí),重組慢病毒體在HepG2細(xì)胞的外轉(zhuǎn)染效率高表達(dá)。經(jīng)Western blotting方法檢測(cè)表達(dá)的TRAIL蛋白。MTT檢測(cè)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染TRAIL-HepG2藥物組細(xì)胞對(duì)細(xì)胞增殖活力的影響明顯低于HepG2和TRAIL-He

3、pG2組（P<0.05），流式細(xì)胞學(xué)檢對(duì)HepG2細(xì)胞周期影響，得出凋亡比例中實(shí)驗(yàn)組明顯高于對(duì)照組，且p值<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義意義。
　　結(jié)論：
　　首先成功構(gòu)建了帶有TRAIL基因的慢病毒載體，并在HepG2的穩(wěn)定高表達(dá)。通過(guò)在實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組中應(yīng)用濃度為0.1μg/mL化療藥物5-FU，兩組的凋亡比例具有明顯的差別，統(tǒng)計(jì)學(xué)有意義（P<0.05）。說(shuō)明該藥物與TRAIL介導(dǎo)的HepG2細(xì)胞協(xié)同作用能加速凋亡過(guò)程，并能明顯