細(xì)胞凋亡抑制蛋白2在胰腺癌中的表達(dá)及其與胰腺癌吉西他濱化療的關(guān)系.pdf

1、目的: 本研究觀察細(xì)胞凋亡抑制蛋白2(cell inhibitor of apoptosis protein2，C-IAP2)在胰腺癌組織以及胰腺癌細(xì)胞中的表達(dá)情況并分析其與病理分級(jí)、臨床分期之間的關(guān)系，并進(jìn)一步闡明C-IAP2的表達(dá)與吉西他濱化療促胰腺癌凋亡作用和胰腺癌吉西他濱化療耐藥的關(guān)系。 方法: 1.收集本院普通外科2005年8月至2008年3月手術(shù)切除的胰腺癌組織標(biāo)本32例，癌旁正常胰腺組織標(biāo)本18例，

2、運(yùn)用免疫組織化學(xué)染色方法觀察C-IAP2在胰腺癌組織以及癌旁正常胰腺組織的表達(dá)情況，分析C-IAP2的表達(dá)水平與胰腺癌組織的病理分級(jí)和臨床分期之間的關(guān)系。Westem blot進(jìn)一步觀察C-IAP2在低分化的胰腺癌PANC-1細(xì)胞、中分化的胰腺癌AsPC-1細(xì)胞、高分化的胰腺癌BxPC-3細(xì)胞中的表達(dá)情況，分析C-IAP2的表達(dá)水平與胰腺癌細(xì)胞的病理分級(jí)之間的關(guān)系。 2.研究吉西他濱體外誘導(dǎo)人胰腺癌PANC-1細(xì)胞凋亡作用和分子

3、機(jī)理，MTT比色法測定細(xì)胞增殖活性，透射電子顯微鏡觀察凋亡細(xì)胞形態(tài)，AnnexinV-PI雙標(biāo)記法流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率，RT-PCR分析細(xì)胞C-IAP2的mRNA表達(dá)，Westem blot法檢測不同濃度吉西他濱作用后C-IAP2、第二線粒體來源的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶激活劑(second mitochondria-derived activator ofcaspase，Smac)、Bcl(B cell Iymphoma)-2和

4、Bax的表達(dá)變化，分光光度法檢測Caspase-3、Caspase-9活性。 3.采用間歇濃度梯度遞增法誘導(dǎo)胰腺癌PANC-1細(xì)胞株對吉西他濱耐藥，檢測其生物學(xué)性狀變化，免疫熒光和免疫印跡法對比觀察C-IAP2活性變化。 結(jié)果: 1.C-IAP2在胰腺癌組織均有表達(dá)(32/32，100％)、癌旁正常胰腺組織(8/18，44.4％)中有表達(dá)，胰腺癌組織中表達(dá)水平顯著強(qiáng)于癌旁正常胰腺組織。C-IAP2的表達(dá)強(qiáng)度在不同

5、分化程度的腫瘤組織中的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。C-IAP2在低分化的胰腺癌細(xì)胞PANC-1中呈高表達(dá)，而在中分化和高分化的胰腺癌細(xì)胞AsPC-1和BxPc-3中表達(dá)較低(P<0.05)。 2.MTT比色法測定顯示：吉西他濱抑制人胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1增殖，呈濃度依賴性：其IC50值為5.79ug/ml。AnnexinV-PI雙標(biāo)記法FCM分析、透射電子顯微鏡觀察的結(jié)果證實(shí)：吉西他濱具有誘導(dǎo)人胰腺癌PANC-1細(xì)胞株凋

6、亡作用。RT-PCR分析發(fā)現(xiàn)吉西他濱能顯著下調(diào)PANC-1細(xì)胞C-IAP2的mRNA表達(dá)，Westem blot分析發(fā)現(xiàn)吉西他濱能顯著下調(diào)胰腺癌細(xì)胞PANC-1的C-IAP2、Bcl-2蛋白表達(dá)水平，上調(diào)Smac、Bax蛋白表達(dá)水平，分光光度法分析發(fā)現(xiàn)吉西他濱作用后胰腺癌PANC-1細(xì)胞的Caspase-3、Caspase-9活性顯著升高。 3.藥物培養(yǎng)3個(gè)月后，得到穩(wěn)定傳代的PANC-1/Gem耐藥細(xì)胞株，其形態(tài)學(xué)、生長特征等

7、均發(fā)生了明顯變化，細(xì)胞變圓、體積縮小、顆粒樣物質(zhì)增多及細(xì)胞倍增時(shí)間延長，對吉西他濱、5-氟尿嘧啶、阿霉素和絲裂霉素的耐藥性均顯著增加；耐藥細(xì)胞PANC-1/Gem的C-IAP2的蛋白表達(dá)水平也明顯增高。 結(jié)論: 1.C-IAP2在胰腺癌組織中的表達(dá)水平以及陽性率均顯著高于癌旁的正常胰腺組織，推測C-IAP2的表達(dá)升高可能在胰腺癌的發(fā)生中起一定作用。C-IAP2的表達(dá)強(qiáng)度在不同分化程度的腫瘤組織和細(xì)胞中的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，