聯(lián)合鹽霉素和吉西他濱殺傷胰腺癌細胞的實驗研究.pdf

1、研究背景和目的：
　　 胰腺癌是惡性程度極高的消化系統(tǒng)腫瘤，其死亡率居于惡性腫瘤相關(guān)死亡的第四位。盡管近年來胰腺癌診治水平明顯提高，其5年生存率仍低于5％。吉西他濱是目前胰腺癌輔助化療的主要藥物，但其有效率并不高。多個Ⅲ期臨床試驗嘗試吉西他濱聯(lián)合其他藥物治療胰腺癌，但同單藥相比并沒有取得更好的效果。近來有研究指出惡性腫瘤中有一小部分稱為腫瘤干細胞，它維系著腫瘤發(fā)生和發(fā)展。目前，已在多個實體瘤包括胰腺癌中發(fā)現(xiàn)干細胞的存在。最新的研

2、究顯示，大部分實體瘤的化療耐藥至少部分同腫瘤干細胞有關(guān)。因此，尋找能夠靶向針對腫瘤干細胞的藥物可能最終提高腫瘤治療療效。鹽霉素，最初被用在反芻類家禽抗細菌、真菌及寄生蟲，近來研究發(fā)現(xiàn)其可選擇性清除乳腺癌干細胞，故而，鹽霉素可能是靶向腫瘤干細胞，我們通過體內(nèi)外研究來探討鹽霉素單藥或聯(lián)合吉西他濱能否根除胰腺癌細胞。
　　 方法:
　　 (1)體外實驗研究鹽霉素和吉西他濱對流式分選后的胰腺癌細胞毒作用
　　 1．自SW

3、1990和AsPC-1中，流式細胞術(shù)分選CD133+/CD133-和側(cè)群細胞(SidePopulation，SP)/非側(cè)群細胞(Non Side Population，NSP)細胞。
　　 2．MTT實驗檢測鹽霉素(Salinomycin，SAL)、吉西他濱(Gemcitabine，GEM)和藥物聯(lián)用(Combination，COM)對CD133+/CD133-和SP/NSP細胞增殖的影響。
　　 3．Annexin V

4、-FITC實驗SAL、GEM和藥物聯(lián)用72h后，對CD133+/CD133-和SP/NSP細胞凋亡的影響。
　　 4．自SW1990中以CD133為標記流式分選細胞后，SAL、GEM和藥物聯(lián)用72h后，觀察體外是否能抑制CD133+/CD133-細胞的平板克隆。進一步行藥物作用后細胞的懸浮腫瘤球培養(yǎng)來進一步檢測藥物對癌細胞自我更新能力的抑制。
　　 (2)藥物治療胰腺癌異移植瘤模型
　　 將自SW1990細胞流式

5、分選后的CD133+和CD133-細胞分別注射于裸鼠背部。
　　 待皮下腫瘤生長至2-4mm時開始給藥。分別腹腔注射：對照磷酸鹽緩沖液(Phosphate Buffered Saline，PBS)，GEM為100mg/kg，每周給藥2次，SAL為4mg/kg，隔日給藥,COM為2藥皆給。分別隔日測量并記錄裸鼠體重及皮下移植瘤的體積，共觀察25天。
　　 結(jié)果:
　　 1、胰腺癌細胞株SW1990，AsPC-1可通

6、過流式細胞術(shù)，以CD133及SP為標記，分別分離出并鑒定為胰腺癌干細胞。
　　 2、隨著藥物濃度增加，單藥吉西他濱或鹽霉素分別殺傷胰腺癌干細胞和非干細胞，二者相比，吉西他濱對非干細胞殺傷更具效力，而鹽霉素對胰腺癌干細胞的殺傷效果顯著。
　　 3、聯(lián)合鹽霉素和吉西他濱對胰腺癌干細胞和非干細胞都有殺傷作用，且相比于單藥效果都顯著(P＜0.01)。
　　 4、鹽霉素僅對胰腺癌干細胞的克隆形成和腫瘤球形成抑制效果好，但聯(lián)

7、合鹽霉素和吉西他濱可清除胰腺癌干細胞及非干細胞的克隆形成及腫瘤球生長（P＜0.01）。
　　 5、CD133+組中，SAL和GEM都可抑制腫瘤生長，但僅聯(lián)合用藥有顯著性效果； GEM和聯(lián)合用藥都明顯抑制有CD133-細胞形成的腫瘤(P＜0.01)。在治療過程中，各組裸鼠體重無明顯差異。
　　 結(jié)論:
　　 鹽霉素可抑制胰腺癌干細胞生長，且體內(nèi)外實驗表明，聯(lián)合鹽霉素和吉西他濱可明顯抑制胰腺癌干細胞和非干細胞。鹽霉素