受體關(guān)聯(lián)蛋白-80對胰腺癌細胞的作用及相關(guān)信號通路.pdf

1、背景和目的:
　　 胰腺癌是目前預(yù)后最差的惡性腫瘤之一，其發(fā)生機理仍未完全明了。我們的前期研究結(jié)果表明受體關(guān)聯(lián)蛋白-80(receptor-associated protein 80，RAP80)的表達在胰腺癌發(fā)生過程中進行性升高。RAP80是在NH2末端含有兩個泛素作用結(jié)構(gòu)域(ubiquitin-interacting motifs，UIM)的核內(nèi)蛋白，功能涉及DNA修復(fù)、（去）泛素化、復(fù)制、轉(zhuǎn)錄等。為明確RAP80在胰腺癌中

2、的作用，本課題檢測了人胰腺癌細胞株、人胰腺癌及癌旁組織RAP80的表達;采用siRNA沉默人胰腺癌細胞株SW1990的RAP80 mRNA表達，檢測其對細胞生長增殖、凋亡和侵襲的作用;并對其作用的分子機制和信號進行了初步研究。通過沉默RAP80表達，檢測胰腺癌細胞株對吉西他濱化療敏感性的變化，為胰腺癌治療提供潛在靶點。
　　 方法:
　　 1.RT-PCR檢測人胰腺癌細胞RAP80 mRNA水平，免疫組化檢測組織芯片31

3、例胰腺癌和癌旁組織RAP80蛋白質(zhì)表達。
　　 2.化學(xué)合成siRNA RAP80轉(zhuǎn)染人胰腺癌細胞株SW1990。MTT測定細胞的生長，流式細胞儀檢測Ki-67表達水平、細胞周期分布及細胞凋亡率，平板克隆形成試驗檢測細胞克隆形成能力，transwell小室檢測細胞侵襲性。
　　 3.Western blot檢測檢測ERα、Cyclin D1、磷酸化ERK1/2及Akt蛋白水平。RT-PCR檢測ERα mRNA水平。

4、>　　 4.體外培養(yǎng)人胰腺癌細胞株SW1990和Capan-2，siRNA RAP80沉默其RAP80表達，MTT法檢測對吉西他濱的敏感性，計算IC50;流式細胞儀檢測細胞凋亡率，RT-PCR檢測凋亡相關(guān)基因TRAIL、Bax、Bcl-2、Survivin表達。
　　 結(jié)果:
　　 1.人胰腺癌細胞株SW1990、Capan-2、BxPC3、Patu-8988均表達RAP80mRNA。胰腺癌組織RAP80蛋白質(zhì)的表達顯

5、著高于癌旁(P＜0.01)。
　　 2.與陰性對照組和空白組相比，siRNA RAP80組細胞的生長增殖顯著降低(P＜0.05)，細胞凋亡率增高(P＜0.05)，G1期細胞明顯增多，G2-M期細胞減少(P＜0.05)，Ki-67表達明顯下降(P＜0.05)，細胞克隆形成能力降低(P＜0.05)，細胞侵襲率無明顯改變(P＞0.05)。
　　 3.沉默RAP80表達在加入雌二醇(E2)的情況下，可顯著降低人胰腺癌細胞株SW1

6、990 ERα蛋白水平(P＜0.01)，但ERα mRNA水平無明顯改變(P＞0.05);抑制RAP80表達，加或不加E2對SW1990細胞的增殖及細胞周期無明顯影響(P＞0.05)。沉默RAP80表達，SW1990細胞Cyclin D1、磷酸化ERK1/2及Akt蛋白水平均無顯著改變(P＞0.05)。
　　 4.沉默RAP80表達可顯著降低吉西他濱對人胰腺癌細胞株SW1990和Capan-2的IC50(P＜0.05)，促進細胞

7、凋亡率(P＜0.05)。RT-PCR檢測Bax mRNA水平顯著升高，Bcl-2 mRNA下降，TRAIL mRNA略微升高，Survivin無明顯改變。
　　 結(jié)論:
　　 1.胰腺癌組織RAP80蛋白的表達顯著升高。
　　 2.沉默RAP80表達可顯著抑制胰腺癌細胞株SW1990的生長增殖和克隆形成能力，促進細胞凋亡，但對細胞的侵襲能力無明顯影響。RAP80對人胰腺癌細胞株SW1990的作用可能與ERα、Cy