Stat1在進(jìn)展期胰腺癌中作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　本研究旨在研究Stat1在胰腺癌進(jìn)展中的相關(guān)作用，探討其與P21及VEGF、MMP2、MMP9的關(guān)系，為進(jìn)一步的臨床試驗(yàn)提供依據(jù)。
　　方法：
　　1.人胰腺癌組織中Stat1及P21的檢測。擬利用免疫組織化學(xué)染色方法觀察腫瘤組織及其癌旁組織中Stat1及P21表達(dá)的差異，同時(shí)分析有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病人中Stat1及P21的表達(dá)水平是否具有差異，并檢測其相關(guān)性。
　　2.體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn):培養(yǎng)人胰腺癌細(xì)胞株

2、BxPC-3，并將其分為三組，Stat1-siRNA轉(zhuǎn)染組、shRNA轉(zhuǎn)染組及空白組，前兩組分別轉(zhuǎn)染Stat1-siRNA質(zhì)粒、shRNA質(zhì)粒，Western-blotting驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效果及VEGF，MMP2和MMP9表達(dá)，遷移實(shí)驗(yàn)和Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)分析Stat1下調(diào)表達(dá)后胰腺癌細(xì)胞遷移能力和侵襲能力的變化，MTT檢測其增殖能力。
　　結(jié)果：
　　1.82例人胰腺癌組織(82％)表達(dá)Stat1蛋白，而72例(72％

3、)表達(dá)p21蛋白。Stat1蛋白的表達(dá)與胰腺癌的腫瘤分化，臨床分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈逆相關(guān)(P＜0.005)，而對年齡，腫瘤大小或侵襲情況無明顯相關(guān)性。而且p21蛋白的表達(dá)也與胰腺癌的腫瘤分化，臨床分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈逆相關(guān)(P值分別為＜0.005，0.025和0.05)，而對年齡，腫瘤大小或侵襲情況無明顯相關(guān)性。Stat1蛋白和p21蛋白在胰腺癌組織中表達(dá)呈正相關(guān)(P＜0.001)。
　　2.成功將Stat1-siRNA質(zhì)粒、sh

4、RNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染胰腺癌細(xì)胞株。MTT試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)siStat1組的增殖明顯增加。Transwell試驗(yàn)證實(shí)SiStat1組中侵襲細(xì)胞的數(shù)量與Stat1組以及對照組相比明顯增加。Western試驗(yàn)顯示VEGF，MMP2和MMP9在siStat1組的表達(dá)水平明顯高于Stat1組的水平
　　結(jié)論：
　　1.Stat1和p21的表達(dá)呈陽性相關(guān)（共表達(dá)于腫瘤細(xì)胞），而Stat1和p21蛋白的失表達(dá)與腫瘤失分化，腫瘤進(jìn)展期和胰腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移

5、相關(guān)。與年齡和腫瘤大小或腫瘤侵襲無明顯相關(guān)。Stat1和p21蛋白表達(dá)的缺失也與胰腺癌患者較差的總生存期相關(guān)。本研究提示Stat1和p21蛋白能夠作為生物標(biāo)記物來對預(yù)測胰腺癌進(jìn)展和預(yù)后做進(jìn)一步評估。
　　2.通過轉(zhuǎn)染STAT1特異性siRNA沉默了STAT1的表達(dá)，并檢測了在不同組人BxPC-3細(xì)胞中VEGF，MMP2和MMP9表達(dá)的相對水平。并且發(fā)現(xiàn)在si-STAT1組中VEGF，MMP2和MMP9表達(dá)的水平明顯高于Stat1組