SMO基因siRNA慢病毒表達載體的構建及其對胰腺癌細胞SMO基因表達的影響.pdf

1、目的：構建攜帶SMO靶向siRNA慢病毒表達載體，并證實其對胰腺癌細胞中SMO基因表達的抑制作用。
　　方法：設計并合成3條SMO基因靶向siRNA片段，利用基因重組技術構建攜帶此3條片段的慢病毒表達載體并測定其滴度，構建好的慢病毒表達載體轉染人胰腺癌細胞株SW1990后，采用RT-PCR法檢測SMO基因的表達以篩選出效果最佳的干擾表達載體，并以此載體轉染SW1990細胞后采用Western blot法檢測SMO蛋白表達。

2、　　結果：基因測序與酶切電泳結果提示成功合成SMO靶向siRNA片段且其正確插入慢病毒表達載體，無堿基缺失錯排與突變，測定病毒滴度分別為5.31×108TU/ML，1.49×109TU/ML及8.50×108TU/ML，經轉染SW1990細胞后，測定對SMO基因表達的抑制率分別為86.00％，74.85%及19.22%，效果最優(yōu)的干擾表達載體轉染SW1990細胞后對SMO蛋白表達的抑制率>80%。
　　結論：成功構建攜帶SMO基因