SFRP5在胰腺癌中的表達(dá)意義及其shRNA慢病毒載體的構(gòu)建.pdf

1、目的：探討 SFRP5基因在胰腺癌組織中的表達(dá)情況及其與臨床病理因素和預(yù)后的關(guān)系，設(shè)計(jì)和構(gòu)建人SFRP5-shRNA慢病毒載體，并進(jìn)行鑒定和包裝，為下一步探索SFRP5在胰腺癌細(xì)胞系中的作用機(jī)理提供實(shí)驗(yàn)材料。
　　方法：收集蘭州大學(xué)第一醫(yī)院普外科2010年至2013年間的胰腺癌石蠟包埋切塊。選擇病理診斷明確、病理和隨訪資料完整的71例標(biāo)本，采用免疫組化方法，檢測(cè)SFRP5在胰腺癌及癌旁組織中的表達(dá)情況，并分析SFRP5的表達(dá)情況與

2、臨床病理因素及患者預(yù)后的關(guān)系；利用Western-bloting和qRT-PCR方法，提取新鮮組織中的蛋白和mRNA，檢測(cè)SFRP5蛋白和SFRP5 mRNA在胰腺癌新鮮組織中的表達(dá)情況。根據(jù) GenBank上公布的人 SFRP5基因信息，構(gòu)建SFRP-shRNA慢病毒干擾載體，通過(guò)293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝，并測(cè)定病毒滴度。
　　結(jié)果：SFRP5蛋白在胰腺癌組織中的表達(dá)明顯低于癌旁組織（40.8％ vs85.7%，P<0.05）

3、，SFRP5蛋白表達(dá)與胰腺癌患者的TNM分期（P<0.05）、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移（P<0.05）、胰周侵犯（P<0.05）及預(yù)后具有相關(guān)性，并且是胰腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立影響因素。成功構(gòu)建SFRP5-shRNA慢病毒載體，轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞后在熒光顯微鏡下可見(jiàn)綠色熒光，并進(jìn)行病毒包裝，純化出慢病毒顆粒，測(cè)得其滴度1*109 TU/ml。
　　結(jié)論：SFRP5蛋白在胰腺癌中表達(dá)消失，是影響胰腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立影響因素，SFRP5低表達(dá)、存在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移