B7-H4在胰腺癌中的表達(dá)及其臨床意義.pdf

1、背景與目的:
　　胰腺癌是一種以起病隱匿、生長迅速并早期轉(zhuǎn)移為特征的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，是死亡率最高的惡性腫瘤之一，目前尚無有效的治療措施，其發(fā)病率在世界范圍內(nèi)呈逐年上升趨勢。由于胰腺組織的解剖位置關(guān)系，早期癥狀不明顯且缺乏有效的檢測手段，大多數(shù)患者就診時(shí)已為中晚期，預(yù)后差，5年生存率不足5％[1-2]。早期發(fā)現(xiàn)與早期診斷是改善胰腺癌患者預(yù)后的有效措施之一。因此，尋找早期診斷、特異性強(qiáng)、靈敏度高的腫瘤分子標(biāo)記物對(duì)于改善胰腺癌患者的預(yù)

2、后具有重要的臨床意義，同時(shí)也能為胰腺癌新型靶向治療技術(shù)提供依據(jù)。
　　B7-H4（也稱為B7S1或B7x）是新近發(fā)現(xiàn)的B7家族成員，能抑制T細(xì)胞增殖、細(xì)胞因子產(chǎn)生和細(xì)胞周期的進(jìn)行，從而抑制T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答[3-6]。B7-H4在腫瘤免疫應(yīng)答中起重要作用。B7-H4 mRNA的在脾、肺、胸腺、胎盤、肝、腎等正常組織中均有表達(dá)[3]，然而，免疫組化顯示，B7-H4蛋白在正常外周組織中幾乎沒有陽性表達(dá)[3]，而在一些腫瘤組織中有豐富

3、表達(dá)，例如乳腺癌、卵巢癌、腎癌、前列腺癌和非小細(xì)胞肺癌[5，7-11]，并與腫瘤進(jìn)展密切相關(guān)。鑒于目前尚無可用于多種方法檢測B7-H4表達(dá)的抗體出售，本研究以穩(wěn)定表達(dá)B7-H4的3T3-B7-H4細(xì)胞為免疫原，制備了能穩(wěn)定分泌特異性單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，并對(duì)其進(jìn)行了生物學(xué)特性分析。同時(shí)，應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色檢測B7-H4在胰腺癌組織中的表達(dá)，探討B(tài)7-H4的表達(dá)與胰腺癌臨床病理特征之間的關(guān)系，分析B7-H4在胰腺癌診療及預(yù)后判斷等方

4、面的潛在價(jià)值。
　　方法:
　　1.以穩(wěn)定表達(dá)B7-H4胞外段的3T3-B7-H4細(xì)胞為免疫原，免疫Babl/C小鼠;應(yīng)用常規(guī)雜交瘤技術(shù)將免疫的小鼠脾細(xì)胞與Sp2/0小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合，使用間接ELISA方法篩選分泌抗B7-H4單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。并對(duì)所獲得的單克隆抗體進(jìn)行亞型鑒定，使用Western blotting、免疫沉淀等方法對(duì)單克隆抗體特異性進(jìn)行鑒定。
　　2.利用制備的小鼠抗B7-H4單克隆抗體，通過

5、免疫組化(IHC)等方法分析B7-H4在胰腺癌組織中的表達(dá)特征，并評(píng)價(jià)其與臨床病理特征的關(guān)系。
　　結(jié)果:
　　1.獲得1株亞型為IgM、輕鏈為κ型的針對(duì)B7-H4的鼠源單克隆抗體:特異性抗B7-H4的單抗3E8能用于免疫沉淀(IP)及IHC等方法檢測組織及細(xì)胞中的B7-H4表達(dá)。
　　2.免疫組化顯示:胰腺癌組織中B7-H4在胞漿和（或）胞膜彌漫表達(dá)，表達(dá)量顯著高于正常胰腺組織(P＜0.05)。B7-H4在臨床腫瘤分