B7-H4在腎透明細胞癌中的表達及其臨床意義.pdf

1、目的：1.探討協(xié)同刺激分子B7-H4在腎透明細胞癌（clear cell renal cell carcinoma，ccRCC）組織以及ccRCC患者血液樣本中的表達及其臨床意義；
　　2.研究腎癌免疫治療藥物IL-2、IFN-α和IFN-γ對人ccRCC細胞株（786-0細胞）增殖活性以及B7-H4分子表達的影響。
　　方法：1.采用免疫組織化學染色方法檢測154例ccRCC患者腫瘤組織以及對應的癌旁正常腎臟組織中B7-H

2、4分子的表達情況，探討ccRCC組織中B7-H4的表達水平及其與ccRCC患者臨床病理特征性指標間的關系；
　　2.采用ELISA方法檢測43例ccRCC患者血液樣本中sB7-H4（soluble B7-H4，可溶性B7-H4）的表達情況，探討sB7-H4的表達與患者臨床病理指標之間的關系；
　　3.用不同濃度的IL-2、IFN-α和IFN-γ刺激786-0細胞24小時，采用CCK-8方法檢測IL-2、IFN-α和IFN-γ

3、對體外培養(yǎng)的ccRCC細胞（786-0細胞）增殖活性的影響；
　　4.用濃度為1000U/ml（786-0細胞的增殖抑制率控制在1％）的IL-2、IFN-α和IFN-γ刺激786-0細胞24小時，采用RT-PCR方法檢測刺激后786-0細胞B7-H4 mRNA的表達，探討IL-2、IFN-α和IFN-γ對786-0細胞B7-H4 mRNA表達的影響；
　　5.用濃度為1000U/ml的IL-2、IFN-α和IFN-γ刺激78

4、6-0細胞24小時，采用免疫細胞化學染色法檢測刺激后786-0細胞B7-H4膜蛋白的表達，探討IL-2、IFN-α和IFN-γ對786-0細胞B7-H4分子表達的影響；
　　6.用濃度為1000U/ml的IL-2、IFN-α和IFN-γ刺激786-0細胞24小時，采用ELISA方法檢測刺激后786-0細胞培養(yǎng)液上清中sB7-H4的表達，探討IL-2、IFN-α和IFN-γ對786-0細胞sB7-H4分子表達的影響；
　　7.

5、用濃度為1000U/ml的IL-2、IFN-α和IFN-γ刺激786-0細胞24小時，采用流式細胞術(shù)檢測刺激后786-0細胞膜B7-H4分子的表達，探討IL-2、IFN-α和IFN-γ對786-0細胞B7-H4分子表達的影響。
　　結(jié)果：1.B7-H4分子在ccRCC組織中可見表達，多定位于細胞膜，少部分表達于胞質(zhì)，在正常腎臟組織中未見表達，ccRCC患者腫瘤組織石蠟切片中B7-H4表達陽性率為59.09%(91/154)，而且B

6、7-H4表達與臨床病理指標（原發(fā)腫瘤分期、區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移及臨床分期）明顯相關（P﹤0.05），而與ccRCC患者一般情況（性別、年齡）無相關；
　　2.ccRCC患者血液中sB7-H4表達的陽性率為53.49%（23/43），而且sB7-H4在患者血液中的表達與ccRCC患者的一般情況（性別、年齡）無明顯相關，而與ccRCC患者的臨床病理指標（原發(fā)腫瘤分期、區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移及臨床分期）呈現(xiàn)明顯相關（P﹤0.05）

7、；
　　3.隨著藥物濃度的增加，IL-2、IFN-α和IFN-γ對786-0細胞的增殖抑制逐漸增加，1%抑制率的最大藥物濃度為1000 U/ml；
　　4. RT-PCR檢測結(jié)果顯示：786-0細胞經(jīng)IL-2、IFN-α和IFN-γ刺激24小時后， B7-H4 mRNA的表達較未刺激組細胞明顯增加；
　　5.免疫細胞化學結(jié)果顯示：786-0細胞經(jīng)IL-2、IFN-α和IFN-γ刺激24小時后，細胞B7-H4陽性表達率明

8、顯高于未刺激組786-0細胞；
　　6. ELISA法檢測顯示：786-0細胞經(jīng)IL-2、IFN-α和IFN-γ刺激24小時后，細胞上清液中sB7-H4的濃度分別為44.89±0.97ng/ml、46.74±2.25ng/ml和47.31±1.12ng/ml，明顯高于未經(jīng)刺激的786-0細胞組34.42±1.69ng/ml。經(jīng)單因素方差分析，其差別具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），兩兩比較可知，各實驗組間差別具有統(tǒng)計學意義（P<0.

9、05）；
　　7.流式細胞術(shù)檢測顯示：786-0細胞經(jīng)IL-2、IFN-α和IFN-γ刺激24小時后，細胞B7-H4陽性表達率分別為（44.89±0.94）%、（46.41±0.55）%和（54.18±1.42）%，明顯高于未刺激組786-0細胞（30.45±0.96）%。經(jīng)單因素方差分析，其的差別具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），兩兩比較可知：對照組與3個藥物刺激組之間的差別具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），IFN-γ刺激組與其余3

10、組之間的差別具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），IL-2刺激組與IFN-α刺激組差距無統(tǒng)計學意義（P=0.235）。
　　結(jié)論：1. B7-H4分子在ccRCC患者腫瘤組織和患者血液樣本中存在表達，而且其表達與患者的臨床病理指標（原發(fā)腫瘤分期、區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移及臨床分期）明顯相關，B7-H4分子可以作為ccRCC患者早期診斷、病情評估以及預后判斷的分子生物學指標；
　　2. IL-2、IFN-α、IFN-γ可以從mRNA