RNAi靶向下調(diào)波形蛋白表達(dá)對(duì)胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1增殖及侵襲能力影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、《中國(guó)圖書(shū)資料分類(lèi)法》單位代碼：10660分類(lèi)號(hào)：R735.9學(xué)號(hào)：S080257貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院2011屆碩士學(xué)位論文屆碩士學(xué)位論文RNAi靶向下調(diào)波形蛋白表達(dá)對(duì)胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC1增殖及侵襲能力影響的實(shí)驗(yàn)研究研究生：韓德愷導(dǎo)師：孫誠(chéng)誼教授年級(jí)：2008級(jí)專(zhuān)業(yè)：外科學(xué)（普外）2011年5月10日貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院2011屆碩士研究生2RNAi靶向下調(diào)波形蛋白表達(dá)對(duì)胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC1增殖及侵襲能力影響的實(shí)驗(yàn)研究肝膽外科，研究生：韓德愷

2、，導(dǎo)師：孫誠(chéng)誼教授摘要目的目的應(yīng)用已構(gòu)建的pGCSILGFPVIMshRNA質(zhì)粒研究其對(duì)胰腺癌細(xì)胞PANC1細(xì)胞的波形蛋白表達(dá)影響及其對(duì)胰腺癌細(xì)胞增殖和侵襲能力的影響。將pGCSILGFPVIMshRNA干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC1，靶向沉默波形蛋白(vimentinVIM)，檢測(cè)vimentin蛋白表達(dá)的變化及基因沉默后胰腺癌細(xì)胞增殖和侵襲力的改變，為靶向治療胰腺癌提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法方法通過(guò)陽(yáng)離子脂質(zhì)體LipofectamiM2

3、000將pGCSILGFPVIMshRNA干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染胰腺癌低分化細(xì)胞株P(guān)ANC1，熒光顯微鏡檢測(cè)轉(zhuǎn)染后PANC1細(xì)胞中外源綠色熒光蛋白（GFP）的表達(dá)。WesternBlot法測(cè)定轉(zhuǎn)染后PANC1細(xì)胞波vimentin的蛋白表達(dá)變化。四甲基偶氮唑藍(lán)法（MTT）檢測(cè)基因沉默前后PANC1細(xì)胞增殖活性的改變。應(yīng)用transwell小室檢測(cè)基因沉默對(duì)PANC1細(xì)胞侵襲力的影響。結(jié)果結(jié)果熒光顯微鏡檢測(cè)到轉(zhuǎn)染干擾質(zhì)粒后PANC1細(xì)胞中有GFP的

4、表達(dá)。WesternBlot法檢測(cè)到轉(zhuǎn)染后PANC1細(xì)胞中vimentin蛋白水平的表達(dá)明顯下降，達(dá)到了靶向沉默vimentin基因的效果。MTT法檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后PANC1細(xì)胞的增殖活性沒(méi)有明顯改變。Transwell小室檢測(cè)出靶向vimentin基因沉默的PANC1細(xì)胞穿透基底膜的細(xì)胞數(shù)量明顯低于未轉(zhuǎn)染PANC1細(xì)胞組(P005)。結(jié)論結(jié)論干擾質(zhì)粒pGCSILGFPVIMshRNA能夠有效抑制PANCl細(xì)胞中波形蛋白的表達(dá)，而進(jìn)一步抑制