RNAi下調(diào)Survivin及VEGF表達抑制胰腺癌細胞增殖、凋亡及血管形成的實驗研究.pdf

1、目的:探討小干擾RNA(small interfering RNA，siRNA)對人胰腺癌細胞株P(guān)ANC-1 Survivin和/或血管內(nèi)皮生長因子(vascularendothelial growth factor, VEGF)表達的抑制作用，對胰腺癌細胞生長、凋亡的影響;并制備相應(yīng)的條件培養(yǎng)基作用于人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)，測定抑制人胰腺癌細胞株P(guān)ANC-1 survivin表達后條件培養(yǎng)基對內(nèi)皮細胞生長、凋亡的影響;

2、　　方法:分別設(shè)計并合成針對Survivin及VEGF的siRNA表達載體，經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染PANC-1細胞。實時熒光定量PCR和Western-blot半定量檢測胰腺癌細胞內(nèi)Survivin和VEGF的表達情況;采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法檢測轉(zhuǎn)染后PANC-1細胞的增殖，流式細胞儀檢測轉(zhuǎn)染后PANC-1細胞的凋亡率;將各組轉(zhuǎn)染后Panc-1細胞培養(yǎng)液收集，作用于人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVEC），四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法檢測HU

3、VEC的增殖，流式細胞儀檢測HUVEC的凋亡率。
　　結(jié)果:1.成功構(gòu)建4個針對Survivin的載體(S1、S2、S3、S4)，Survivin mRNA及蛋白表達明顯下降，其中載體S4抑制效率最高;抑制Survivin表達后胰腺癌細胞Panc-1增殖減慢，細胞凋亡率增加;同時HUVEC（人臍靜脈內(nèi)皮細胞）增殖減慢，細胞凋亡率增加。
　　2.成功構(gòu)建4個針對VEGF的載體(V1、V2、V3、V4)，VEGFmRNA及蛋白表

4、達明顯下降，其中載體V3抑制效率最高;抑制VEGF表達后胰腺癌細胞Panc-1增殖減慢，細胞凋亡率增加;同時HUVEC（人臍靜脈內(nèi)皮細胞）增殖減慢，細胞凋亡率增加。
　　3.同時抑制Survivin和VEGF表達后，較對照組及單獨抑制Survivin或VEGF組，胰腺癌細胞Panc-1增殖顯著減慢，細胞凋亡率顯著增加;同時HUVEC（人臍靜脈內(nèi)皮細胞）增殖顯著減慢，細胞凋亡率顯著增加。
　　結(jié)論:1.靶向Survivin或V

5、EGF的RNAi能夠有效抑制胰腺癌細胞Survivin的表達，抑制胰腺癌細胞的增殖，增加胰腺癌細胞的凋亡，并通過抑制血管內(nèi)皮細胞的增殖，增加血管內(nèi)皮細胞的凋亡，抑制腫瘤血管的形成。
　　2.同時靶向Survivin及VEGF的RNAi能夠同時有效抑制胰腺癌細胞Survivin及VEGF的表達，較單獨抑制Survivin或VEGF，顯著抑制胰腺癌細胞的增殖，增加胰腺癌細胞的凋亡，并通過抑制血管內(nèi)皮細胞的增殖，顯著增加血管內(nèi)皮細胞的凋