VEGF反義核酸對胰腺癌增殖及血管生成影響的研究.pdf

1、復旦大學博士學位論文VEGF反義核酸對胰腺癌增殖及血管生成影響的研究姓名：韓松申請學位級別：博士專業(yè)：外科學普通外科指導教師：倪泉興20030506化顯示VEGF反義核酸對細胞表面的VEGF也有明顯的抑制作用，而VEGF受體一Flk1的表達顯著上升。Pearson相關性分析顯示VEGF陽性率與Flk一1陽性率呈明顯的負相關(P=0017)。研究發(fā)現(xiàn)抑制胰腺癌細胞VEGF的表達能降低細胞Bcl2的表達。但兩者相關性無統(tǒng)計學意義(P=007

2、4)?？寺⌒纬稍囼烇@示轉(zhuǎn)染反義表達質(zhì)粒的胰腺癌細胞克隆形成率明顯降低，生長曲線測定顯示細胞生長受到顯著抑制。表明VEGF反義核酸能抑制胰腺癌的單細胞增殖能力，降低腫瘤細胞的獨立生存能力及對生存環(huán)境的適應性。AnnexinVFITC和PI雙標記流式細胞儀檢測凋亡結果顯示VEGF反義核酸能促進腫瘤細胞的凋亡。通過測定Ecv304生長曲線，顯示腫瘤細胞培養(yǎng)液上清促血管內(nèi)皮細胞生長作用受到明顯的抑制。體外血管生成試驗顯示培養(yǎng)液上清的體外促血管生

3、成活性受到顯著抑制。通過BxPC3胰腺癌細胞皮下注射的方法，我們成功建立了胰腺癌裸鼠移植瘤模型，并研究了VEGF反義核酸對胰腺癌細胞在裸鼠體內(nèi)增殖的影響及移植瘤血管生成的變化。在體內(nèi)研究中，我們觀察了移植瘤體積的變化。裸鼠處死后，稱取移植瘤的重量。瘤體行病理切片，免疫組化染色檢測VEGF、Flk1、Bcl2表達變化。HE染色觀察移植瘤血管生成情況，并行血管內(nèi)皮細胞特異性Ⅷ因子相關抗原的免疫組化染色。采用IHS評分判定VEGF、Flk一1

4、、Bcl2表達水平，測定移植瘤微啦管密度(MVD)。體內(nèi)研究結果顯示，轉(zhuǎn)染VEGFl21反義表達質(zhì)粒的胰腺癌裸鼠移植瘤生長緩慢，體積最小，最大直徑不超過5mm。免疫組化顯示移植瘤VEGF、FIll、Bcl一2的表達變化與體外培養(yǎng)條件下類似，即轉(zhuǎn)染反義表達質(zhì)粒的移植瘤VEGF、Bcl2表達受抑制，F(xiàn)lk1表達水平上升。常規(guī)HE染色顯示，轉(zhuǎn)染VEGFl2l反義表達質(zhì)粒的胰腺癌裸鼠移植瘤包膜下缺乏血管結構，瘤體內(nèi)亦缺乏明顯的血管結構及結締組織

5、。而對照組具有豐富的血管結構，尤其以瘤體包膜下及腫瘤結締組織內(nèi)最為豐富。血管內(nèi)皮細胞特異性Ⅷ因子相關抗原的免疫組化染色顯示對照組瘤體包膜下及腫瘤結締組織內(nèi)有豐富的棕黃色陽性染色的血管內(nèi)皮細胞。而轉(zhuǎn)染反義表達質(zhì)粒的移植瘤則缺乏陽性染色的血管內(nèi)皮細胞，微血管密度顯著下降?？傊?，研究揭示VEGF反義核酸無論在體外還是在體內(nèi)都能顯著抑制胰腺癌的增殖，誘導凋亡，抑制胰腺癌的血管生成。從而為將來采用VEGF反義核酸對胰腺癌患者進行基因治療積累了理論