COX-2特異性抑制劑NS-398對(duì)人胰腺癌增殖及腫瘤血管生成影響.pdf

1、目的:胰腺癌惡性度高，因早起癥狀隱匿而難以發(fā)現(xiàn)，發(fā)現(xiàn)時(shí)手術(shù)可切除率較低，對(duì)于該腫瘤治療目前仍沒(méi)有較好的治療方法，因此需不斷探索胰腺癌全新治療方法。本試驗(yàn)旨在檢測(cè)人胰腺癌細(xì)胞BxPC-3、SWI990、Capan-2、Aspc-1、Panc-1中COX-2、VEGF表達(dá)情況，觀察NS-398對(duì)人胰腺癌細(xì)胞株在體外生長(zhǎng)活力的影響，并選擇適合的細(xì)胞系建立裸鼠人胰腺癌原位異種移植瘤模型，在體內(nèi)進(jìn)一步探討COX-2特異性抑制劑NS-398對(duì)人胰腺

2、癌的增殖抑制作用及對(duì)裸鼠異種原位移植瘤模型中瘤體血管生成的影響，初步探討NS-398抗腫瘤血管生成的作用機(jī)制。
　　研究方法:以人胰腺癌細(xì)胞株BxPC-3、SWI990、Capan-2、Aspc-1、Panc-1為研究對(duì)象;其中COX-2及VEGF表達(dá)情況采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)其mRNA表達(dá)、Western檢測(cè)蛋白表達(dá)情況，瓊脂糖電泳驗(yàn)證QPCR中DNA產(chǎn)物片段長(zhǎng)度。四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法在體外檢測(cè)不同濃度NS-398對(duì)人

3、胰腺癌細(xì)胞增殖影響?；隗w外實(shí)驗(yàn)結(jié)論篩選出最敏感細(xì)胞株建立裸鼠人胰腺癌原位移植瘤模型，裸鼠30只造模后隨機(jī)分為2組，每組15只，對(duì)照組(術(shù)后15天每隔三日腹腔注射生理鹽水0.2ml)，實(shí)驗(yàn)組(術(shù)后15天每隔三日腹腔注射N(xiāo)S-3986mg/kg)。進(jìn)一步研究NS-398在體內(nèi)的抑制作用及NS-398治療組瘤體與對(duì)照瘤體大小差異，各臟器轉(zhuǎn)移情況。標(biāo)本行HE染色鑒定腫瘤，應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)胰腺癌組織中COX-2、VEGF蛋白表達(dá)情況及腫瘤微

4、血管密度(MVD)測(cè)定。
　　結(jié)果:人胰腺癌細(xì)胞株BxPC-3、SW1990、Capan-2、 Aspc-1、Panc-1中均有COX-2及VEGF表達(dá)，QPCR檢測(cè)結(jié)果顯示，人胰腺癌細(xì)胞BxPC-3、SW1990、Capan-2、Aspc-1、Panc-1中COX-2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平分別為1.0000±0.0322、0.1417±0.0422、0.5617±0.0931、0.0022±0.0414、0.0037±0.031

5、2，VEGFmRNA的相對(duì)表達(dá)量分別為1.0000±0.0211、0.3197±0.0356、0.5443±0.0508、0.4054±0.0651、0.2444±0.0489。人胰腺癌細(xì)胞BxPC-3、SW1990、Capan-2、Aspc-1、Panc-1中COX-2蛋白相對(duì)表達(dá)水平分別為1.5910±0.0689、0.9577±0.0701、0.8972±0.0821、0.3638±0.0224、0.3923±0.0407。VEG

6、F蛋白相對(duì)表達(dá)水平分別為1.0038±0.0291、0.6365±0.0599、0.6784±0.0434、0.4657±0.0616、0.4063±0.0588。
　　其中以Bxpc-3細(xì)胞表達(dá)較顯著。MTT亦顯示NS-398在體外可抑制人胰腺癌細(xì)胞增殖活性，呈時(shí)間-劑量依賴(lài)效應(yīng)關(guān)系，并與細(xì)胞COX-2及VEGF表達(dá)強(qiáng)度有關(guān)，濃度在12.5-100umol/L時(shí)，隨著濃度的增大和培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)吸光度值明顯變小，COX—2及VEG

7、F表達(dá)強(qiáng)度越高，藥物對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)活性的抑制作用越強(qiáng)。造模后30只裸鼠術(shù)后第一天死亡1只可能為麻醉意外，第二天死亡一只，接種后第57天，處死荷瘤鼠解刨觀察原位移植瘤的生長(zhǎng)。28只裸鼠25只胰腺均移植瘤生長(zhǎng)，接種成功率89.28％，其中NS-398治療平均組腫瘤的體積20.2152±4.8576mm3，對(duì)照組為204.4444±14.1408mm3，平均抑瘤率達(dá)90.11％。P=0.000。行HE染色證實(shí)為胰腺癌，免疫組化檢測(cè)NS-398治療

8、組中COX-2、VEGF的表達(dá)水平均較對(duì)照組明顯降低，TCOX-2=5.196，PCOX-2=0.035，TVEGF=4.427，PVEGF=0.021與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。VEGF與COX-2存在相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)為0.828(P=0.03).MVD結(jié)果顯示對(duì)照組計(jì)數(shù)平均值為27.4±7.7，治療組計(jì)數(shù)為9.2±1.4，NS-398治療組裸鼠腫瘤組織中MVD明顯低于對(duì)照組，T=4.674，P=0.010，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。MVD