褪黑素對人胰腺癌細胞株SW1990生長及血管生成的影響.pdf

1、本研究分為二部分： 第一部分：褪黑素對人胰腺癌細胞株SW1990生長及血管生成的影響 目的：研究褪黑素( Melatonin，MT)對人胰腺癌細胞株SW1990細胞體外生長及血管形成的影響，同時探討其對胰腺癌細胞株SW1990作用的可能機制。 方法：采用MT濃度為0.1、0.5、1.0、2.5、5.0mmol/L處理胰腺癌SW1990細胞后，應用四氮唑鹽(MTT)法檢測OD值，計算對照組和各實驗組SW1990細胞

2、的抑制率，并計算最適宜的褪黑素IC50；取MT濃度為1.0、2.5、5.0mmol/L處理胰腺癌SW1990細胞后進行流式細胞術及Annexin V/PI早期凋亡檢測細胞凋亡率和細胞周期的變化，免疫印跡法(Westen Blotting)檢測細胞凋亡因子cl-2、bax蛋白表達情況，RT-PCR檢測VEGFmRNA表達水平的變化，雞胚絨毛尿囊膜實驗觀察MT對血管生成的影響。 結果：(1) MTT法顯示MT可明顯抑制SW1990細

3、胞的生長，并隨著濃度的增加和作用時間的延長而明顯增強(P<0.05)。(2)流式細胞術及Annexin V/PI早期凋亡檢測出SW1990細胞經MT作用48小時后，細胞有明顯凋亡，且以早期凋亡為主，在1.0mmol/L濃度下早期凋亡率為(24.5±2.14)％，而在5.0mmol/L濃度下為(44.76±3.24)％，與MT濃度呈正相關，且隨著濃度的增加SW1990細胞周期G0/G1期細胞比例上升，從(72.55±4.32)％上升到(8

4、5.33±5.32)％，S期細胞比例下降(P<0.05)。(3)Western Blot結果顯示MT作用于SW1990細胞48h可使細胞中的bcl-2蛋白表達下降，bax蛋白表達升高，bcl-2/bax比值分別為對照組1.84±0.21，MTi組1.21±0.25，MT2組0.70±0.19，MT3組0.55±0.13，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。(4)RT-PCR檢測VEGF表明SW1990細胞經MT作用48小時后，VEGFm

5、RNA的表達呈濃度依賴性下降，各濃度組與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。(5)雞胚絨毛尿囊膜實驗發(fā)現(xiàn)MT處理組(1.0mmol/L、2.5 mmol/L、5.0 mmol/L)雞胚絨毛尿囊膜二、三級血管數(shù)目減少，濃度越高作用越明顯，各組三級血管的數(shù)目與生理鹽水組比較，差異有顯著性(P<0.01)。從形態(tài)上看，生理鹽水組(NS)血管分支狀結構完整，各級血管清晰可見，MT組可見血管明顯變細，呈迂曲狀向外周生長，失去正常的血管樹枝

6、狀分布，并可見雞胚絨毛尿囊膜水腫。 結論：MT可抑制胰腺癌SW1990細胞的生長，且呈時間和劑量的依賴性，其機制可能是直接抑制腫瘤細胞增殖；阻滯細胞周期于靜止期；誘導細胞早期凋亡；抑制血管生成。 第二部分：褪黑素聯(lián)合吉西他濱對胰腺癌細胞SW1990的影響 目的：探討褪黑素(melatonin，MT)聯(lián)合吉西他濱(Gemcitabine，GEM)對胰腺癌SW1990細胞的協(xié)同抑制作用及機制。 方法：以濃度為

7、1.5mmol/L的褪黑素聯(lián)合20μmol/L的吉西他濱處理對數(shù)生長期的人胰腺癌SW1990細胞，應用MTT比色法檢測OD值，計算對照組和各實驗組SW1990細胞的抑制率；AnnexinV/PI雙染法檢測SW1990細胞早期凋亡情況；RT-PCR半定量檢測Bcl-2mRNA及BaxmRNA的表達水平。 結果：褪黑素和吉西他濱都能有效地抑制人胰腺癌SW1990細胞增殖，二者聯(lián)合作用后，具有協(xié)同效應，MT組作用SW1990細胞48h