硼替佐米對(duì)胰腺癌細(xì)胞株Bxpc-3、SW1990生長(zhǎng)抑制作用及其機(jī)制的體外研究.pdf

1、背景與目的：
　　胰腺癌是一種死亡率極高的消化系統(tǒng)惡性腫瘤,尋找有效治療方案,提高患者生存率一直是困擾醫(yī)學(xué)界的難題。蛋白酶體抑制劑—硼替佐米(PS-341,商品名:萬(wàn)珂)是一種新型抗腫瘤制劑,已被美國(guó)食品藥品管理局(FDA)批準(zhǔn)用于反復(fù)性或頑固性的多發(fā)性骨髓瘤治療。研究發(fā)現(xiàn)硼替佐米對(duì)大部分腫瘤也具有抗癌活性,包括小細(xì)胞肺癌、乳腺癌、前列腺癌等。硼替佐米單藥或聯(lián)合其他化療藥物在體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)中均能有效地抑制腫瘤生長(zhǎng)。國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道硼替

2、佐米在不同癌細(xì)胞株中敏感性差異甚大,而與治療敏感性相關(guān)的分子機(jī)制研究國(guó)內(nèi)外鮮有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究硼替佐米對(duì)兩種胰腺癌細(xì)胞株Bxpc-3、SW1990細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡的影響,檢測(cè)凋亡相關(guān)分子表達(dá)變化,探索硼替佐米殺傷癌細(xì)胞可能機(jī)制及與其藥物敏感性相關(guān)的基因。
　　方法：
　　1.采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn),不同濃度梯度硼替佐米對(duì)兩種胰腺癌細(xì)胞活力的影響,初步確定合適作用時(shí)間及藥物濃度進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

3、　　2.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)硼替佐米在體外誘導(dǎo)兩種胰腺癌細(xì)胞株凋亡情況,同時(shí)觀察相同條件下硼替佐米對(duì)兩種胰腺癌細(xì)胞株凋亡的差異。
　　3.采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)硼替佐米對(duì)兩種胰腺癌細(xì)胞mRNA水平相關(guān)分子表達(dá)變化的影響,觀察硼替佐米抗癌活性相關(guān)分子通路及與藥物敏感性相關(guān)可能機(jī)制。
　　4.通過(guò)蛋白質(zhì)免疫印跡分析法(WB)檢測(cè)硼替佐米對(duì)兩種胰腺癌細(xì)胞蛋白水平相關(guān)分子表達(dá)變化影響,進(jìn)一步驗(yàn)證硼替佐米抗癌活性相關(guān)分子

4、通路及與藥物敏感性有關(guān)的可能分子。
　　結(jié)果：
　　1.硼替佐米濃度大于50nM/L時(shí),兩種胰腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制且呈濃度依耐性。同等條件下,硼替佐米對(duì)Bxpc-3細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率明顯大于SW1990細(xì)胞,兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。
　　2.50、100nM/L硼替佐米作用于 Bxpc-3和 SW1990細(xì)胞48h,細(xì)胞凋亡率分別(10.52±1.05)％、(22.56±4.23)％和(6.23±0.34)％、

5、(12.71±2.23)％,顯著高于0nm/L組的(2.15±0.47)％和(2.32±0.54)％,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。同等條件下,50、100nM/L組Bxpc-3細(xì)胞凋亡率明顯大于SW1990細(xì)胞,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)
　　3.與對(duì)照組相比,10nM/L、100nM/L硼替佐米處理 Bxpc-3、SW1990細(xì)胞后, Bak mRNA表達(dá)量組間無(wú)明顯差異(P均>0.05);Bax mRNA表

6、達(dá)上調(diào)(P均<0.05),組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;Bcl-2 mRNA和Bcl-XL mRNA表達(dá)下調(diào)(P均<0.05),各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;而Survivin mRNA在Bxpc-3細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)(P<0.05),SW1990細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)(P<0.05),組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4.與對(duì)照組相比,10nM/L、100nM/L硼替佐米處理后 Bxpc-3、SW1990細(xì)胞中caspase-3蛋白均裂解激活[pro-cas

7、pase-3蛋白表達(dá)減弱(P均<0.05),cleaved-caspase-3蛋白表達(dá)增強(qiáng)(P均<0.05)],Bax蛋白表達(dá)增強(qiáng)(P均<0.05),Bcl-2蛋白表達(dá)減弱(P均<0.05),組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;Survivin蛋白在Bxpc-3細(xì)胞表達(dá)明顯減弱(P<0.05),而在SW1990細(xì)胞中持續(xù)高表達(dá)(P<0.05)
　　結(jié)論：
　　硼替佐米抑制胰腺癌細(xì)胞Bxpc-3、SW1990增殖、誘導(dǎo)凋亡,其機(jī)制可能與激