胰腺癌進展與血管生成因子表達及調控的相關研究.pdf

1、本文擬通過檢測胰腺癌病人外周血清中血管生成因子表達的變化，即血管生成因子在機體的綜合表達情況，研究其在胰腺癌進展中的作用及臨床意義；進一步，通過對多株胰腺癌細胞血管生成因子表達水平差異與胰腺癌細胞株的惡性生物學表現(xiàn)，如生長、增殖及侵襲進行對比研究，以期在細胞水平探討血管生成因子與癌細胞惡性行為的關系，為評估抗血管形成治療及提出治療策略提供有力的理論和實驗依據(jù)。具體工作分為兩部分： 第一部分胰腺癌病人外周血血管生成因子表達水平變化

2、與疾病進展關系的研究：通過酶聯(lián)免疫吸附實驗(Enzyme-linked immunosorbent assay ELISA)檢測胰腺癌病人、胰腺炎病人及正常人外周血血清中血管生成因子濃度，對照臨床診治資料進行分析。結果顯示：促/抑血管生成因子在胰腺癌病人外周血高中表達，胰腺癌病人中不能手術切除組較手術切除組VEGF、angiostatin及endostatin表達顯著升高，胰腺癌病人術后一周VEGF及IFG-1表達升高，TSP-1、an

3、giostatin及endostatin顯著降低。VEGF與腫瘤分化、淋巴轉移、血管侵犯、遠處轉移及臨床分期密切相關，bFGF與腫瘤分化及腫瘤大小密切相關，IGF-1與血管侵犯密切相關，endostatin與腫瘤大小密切相關，angiostatin與腫瘤大小及血管侵犯密切相關，TSP-1與血管侵犯及遠處轉移密切相關。vEGF表達與endostatin表達顯著相關，bFGF表達與endostatin及angiostatin表達顯著相關，e

4、ndostatin表達與angiostatin表達顯著相關。 第二部分胰腺癌細胞株血管生成因子表達水平與其細胞生物學特性的相關研究：通過逆轉錄聚合酶鏈式反應(Reverse transcription polymerase chainreaction RT-PCR)及ELISA檢測多株胰腺癌細胞及培養(yǎng)上清液中血管生成因子表達水平，同時通過CCK-8及Boyden Chamber趨化小室法進行胰腺癌細胞株sw1990、Capan-

5、1、Aspc-1，MiaPaCa-2，Panc-1及：PCT-3的增殖及侵襲性檢測。結果顯示：VEGF在6株細胞中均有表達，各株表達量存在顯著差異，以侵襲性最強的Panc-1表達最強。bFGF在6株細胞中均有表達，各組表達量亦存在顯著差異，增殖及侵襲性較強的Panc-1和PCT-3中的表達也強于其他細胞株。RT-PCR實驗結果顯示6株胰腺癌細胞株均無IGF-I表達。6株胰腺癌細胞TSP-1表達差異顯著，總體表達水平較低。6株胰腺癌細胞e

6、ndostatin表達差異顯著，在侵襲性最強的Panc-1中表達最強，其他細胞株不表達或表達量很低。血管生成因子在同一胰腺癌細胞株存在共表達。胰腺癌細胞株胞外的vEGF及endostatin表達顯著強于胞內表達，bFGF胞內表達顯著強于胞外表達。 通過siRNA技術干預胰腺癌細胞株SW1990、Panc-1及PCT-3的VEGF和bFGF的表達，CCK-8及：Boyden Chamber趨化小室法觀察胰腺癌細胞增殖及侵襲性變化。

7、結果顯示：抑制VEGF和bFGF表達，SW1990、Panc-1及PCT-3侵襲性減弱，Sw1990增殖顯著抑制，PCT-3增殖趨勢受抑，Panc-1與對照組無差異；同時抑制VEGF及bFGF表達與單獨抑制VEGF及bFGF表達相比較，在不同細胞株對增殖及侵襲性影響不盡相同。 通過sirNA技術干預胰腺癌細胞株SW1990、Panc-1及PCT-3的VEGF和bFGF的表達，RT-PCR及ELISA觀察血管生成因子VEGF、bF

8、GF及endostatin表達變化。結果顯示：通過VEGFsiRNA能夠顯著抑制VEGF表達，同時SW1990、Pane-1及PCT-3三株胰腺癌細胞株bFGF在mRNA水平及細胞外分泌水平表達均升高，SW1990及Pane-1顯著升高。通過bFGFsiRNA能夠顯著抑制bFGF表達，同時VEGF在SWl990、Panc-1及PCT-3在mRNA水平及細胞外分泌水平降低，PCT-3及Pane-1在mRNA水平降低顯著，SW1990及PC

9、T-3在細胞外分泌水平降低顯著。抑制VEGF或bFGF表達，三株細胞endostatin mRNA在不同處理組表達無顯著變化，SWl990及PCT-3 endostatin在細胞外分泌水平表達顯著降低，Panc-1無顯著變化。通過研究可以得出以下結論： 1.血管生成因子表達與胰腺癌進展密切相關，對臨床病人外周血血管生成因子的檢測能夠為胰腺癌診斷、鑒別診斷、手術可切除性判斷及預后估計提供有力依據(jù)。 2.胰腺癌細胞在血管生成

10、因子表達調控中發(fā)揮重要作用，在參與調節(jié)腫瘤局部血管生成同時可能通過血管生成因子的活化及表達調節(jié)在癌細胞惡性增殖及侵襲過程中發(fā)揮重要的調節(jié)作用。血管生成因子表達水平可能與胰腺癌細胞生物學特性密切相關。 3.胰腺癌細胞株增殖及侵襲性與VEGF及bFGF表達關系密切，通過siRNA能夠抑制胰腺癌細胞VEGF及bFGF表達，同時能夠顯著抑制腫瘤增殖并下調胰腺癌細胞侵襲性。VEGF和bFGF可能成為胰腺癌抗血管治療的理想靶標，同時抑制VE

11、GF及bFGF對特定細胞株增殖或侵襲性的影響具有協(xié)同作用。 4.siRNA技術能夠顯著抑制相應血管生成因子的表達。胰腺癌細胞內vEGF與bFGF的表達調控之間，VEGF和bFGF表達與抑血管生成因子endostatin表達調控之間存在復雜的相互調節(jié)作用。VEGF及bFGF表達之間的調節(jié)可能發(fā)生在轉錄水平，VEGF及bFGF表達變化對于endostatin表達的調節(jié)作用可能發(fā)生在轉錄水平以后，對膠原蛋白ⅩⅧ水解的調節(jié)可能是其主要機