胰腺癌進(jìn)展與血管生成因子表達(dá)及調(diào)控的相關(guān)研究.pdf

1、本文擬通過檢測胰腺癌病人外周血清中血管生成因子表達(dá)的變化，即血管生成因子在機(jī)體的綜合表達(dá)情況，研究其在胰腺癌進(jìn)展中的作用及臨床意義；進(jìn)一步，通過對多株胰腺癌細(xì)胞血管生成因子表達(dá)水平差異與胰腺癌細(xì)胞株的惡性生物學(xué)表現(xiàn)，如生長、增殖及侵襲進(jìn)行對比研究，以期在細(xì)胞水平探討血管生成因子與癌細(xì)胞惡性行為的關(guān)系，為評估抗血管形成治療及提出治療策略提供有力的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。具體工作分為兩部分： 第一部分胰腺癌病人外周血血管生成因子表達(dá)水平變化

2、與疾病進(jìn)展關(guān)系的研究：通過酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(Enzyme-linked immunosorbent assay ELISA)檢測胰腺癌病人、胰腺炎病人及正常人外周血血清中血管生成因子濃度，對照臨床診治資料進(jìn)行分析。結(jié)果顯示：促/抑血管生成因子在胰腺癌病人外周血高中表達(dá)，胰腺癌病人中不能手術(shù)切除組較手術(shù)切除組VEGF、angiostatin及endostatin表達(dá)顯著升高，胰腺癌病人術(shù)后一周VEGF及IFG-1表達(dá)升高，TSP-1、an

3、giostatin及endostatin顯著降低。VEGF與腫瘤分化、淋巴轉(zhuǎn)移、血管侵犯、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及臨床分期密切相關(guān)，bFGF與腫瘤分化及腫瘤大小密切相關(guān)，IGF-1與血管侵犯密切相關(guān)，endostatin與腫瘤大小密切相關(guān)，angiostatin與腫瘤大小及血管侵犯密切相關(guān)，TSP-1與血管侵犯及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。vEGF表達(dá)與endostatin表達(dá)顯著相關(guān)，bFGF表達(dá)與endostatin及angiostatin表達(dá)顯著相關(guān)，e

4、ndostatin表達(dá)與angiostatin表達(dá)顯著相關(guān)。 第二部分胰腺癌細(xì)胞株血管生成因子表達(dá)水平與其細(xì)胞生物學(xué)特性的相關(guān)研究：通過逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Reverse transcription polymerase chainreaction RT-PCR)及ELISA檢測多株胰腺癌細(xì)胞及培養(yǎng)上清液中血管生成因子表達(dá)水平，同時(shí)通過CCK-8及Boyden Chamber趨化小室法進(jìn)行胰腺癌細(xì)胞株sw1990、Capan-

5、1、Aspc-1，MiaPaCa-2，Panc-1及：PCT-3的增殖及侵襲性檢測。結(jié)果顯示：VEGF在6株細(xì)胞中均有表達(dá)，各株表達(dá)量存在顯著差異，以侵襲性最強(qiáng)的Panc-1表達(dá)最強(qiáng)。bFGF在6株細(xì)胞中均有表達(dá)，各組表達(dá)量亦存在顯著差異，增殖及侵襲性較強(qiáng)的Panc-1和PCT-3中的表達(dá)也強(qiáng)于其他細(xì)胞株。RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示6株胰腺癌細(xì)胞株均無IGF-I表達(dá)。6株胰腺癌細(xì)胞TSP-1表達(dá)差異顯著，總體表達(dá)水平較低。6株胰腺癌細(xì)胞e

6、ndostatin表達(dá)差異顯著，在侵襲性最強(qiáng)的Panc-1中表達(dá)最強(qiáng)，其他細(xì)胞株不表達(dá)或表達(dá)量很低。血管生成因子在同一胰腺癌細(xì)胞株存在共表達(dá)。胰腺癌細(xì)胞株胞外的vEGF及endostatin表達(dá)顯著強(qiáng)于胞內(nèi)表達(dá)，bFGF胞內(nèi)表達(dá)顯著強(qiáng)于胞外表達(dá)。 通過siRNA技術(shù)干預(yù)胰腺癌細(xì)胞株SW1990、Panc-1及PCT-3的VEGF和bFGF的表達(dá)，CCK-8及：Boyden Chamber趨化小室法觀察胰腺癌細(xì)胞增殖及侵襲性變化。

7、結(jié)果顯示：抑制VEGF和bFGF表達(dá)，SW1990、Panc-1及PCT-3侵襲性減弱，Sw1990增殖顯著抑制，PCT-3增殖趨勢受抑，Panc-1與對照組無差異；同時(shí)抑制VEGF及bFGF表達(dá)與單獨(dú)抑制VEGF及bFGF表達(dá)相比較，在不同細(xì)胞株對增殖及侵襲性影響不盡相同。 通過sirNA技術(shù)干預(yù)胰腺癌細(xì)胞株SW1990、Panc-1及PCT-3的VEGF和bFGF的表達(dá)，RT-PCR及ELISA觀察血管生成因子VEGF、bF

8、GF及endostatin表達(dá)變化。結(jié)果顯示：通過VEGFsiRNA能夠顯著抑制VEGF表達(dá)，同時(shí)SW1990、Pane-1及PCT-3三株胰腺癌細(xì)胞株bFGF在mRNA水平及細(xì)胞外分泌水平表達(dá)均升高，SW1990及Pane-1顯著升高。通過bFGFsiRNA能夠顯著抑制bFGF表達(dá)，同時(shí)VEGF在SWl990、Panc-1及PCT-3在mRNA水平及細(xì)胞外分泌水平降低，PCT-3及Pane-1在mRNA水平降低顯著，SW1990及PC

9、T-3在細(xì)胞外分泌水平降低顯著。抑制VEGF或bFGF表達(dá)，三株細(xì)胞endostatin mRNA在不同處理組表達(dá)無顯著變化，SWl990及PCT-3 endostatin在細(xì)胞外分泌水平表達(dá)顯著降低，Panc-1無顯著變化。通過研究可以得出以下結(jié)論： 1.血管生成因子表達(dá)與胰腺癌進(jìn)展密切相關(guān)，對臨床病人外周血血管生成因子的檢測能夠?yàn)橐认侔┰\斷、鑒別診斷、手術(shù)可切除性判斷及預(yù)后估計(jì)提供有力依據(jù)。 2.胰腺癌細(xì)胞在血管生成

10、因子表達(dá)調(diào)控中發(fā)揮重要作用，在參與調(diào)節(jié)腫瘤局部血管生成同時(shí)可能通過血管生成因子的活化及表達(dá)調(diào)節(jié)在癌細(xì)胞惡性增殖及侵襲過程中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。血管生成因子表達(dá)水平可能與胰腺癌細(xì)胞生物學(xué)特性密切相關(guān)。 3.胰腺癌細(xì)胞株增殖及侵襲性與VEGF及bFGF表達(dá)關(guān)系密切，通過siRNA能夠抑制胰腺癌細(xì)胞VEGF及bFGF表達(dá)，同時(shí)能夠顯著抑制腫瘤增殖并下調(diào)胰腺癌細(xì)胞侵襲性。VEGF和bFGF可能成為胰腺癌抗血管治療的理想靶標(biāo)，同時(shí)抑制VE

11、GF及bFGF對特定細(xì)胞株增殖或侵襲性的影響具有協(xié)同作用。 4.siRNA技術(shù)能夠顯著抑制相應(yīng)血管生成因子的表達(dá)。胰腺癌細(xì)胞內(nèi)vEGF與bFGF的表達(dá)調(diào)控之間，VEGF和bFGF表達(dá)與抑血管生成因子endostatin表達(dá)調(diào)控之間存在復(fù)雜的相互調(diào)節(jié)作用。VEGF及bFGF表達(dá)之間的調(diào)節(jié)可能發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平，VEGF及bFGF表達(dá)變化對于endostatin表達(dá)的調(diào)節(jié)作用可能發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平以后，對膠原蛋白ⅩⅧ水解的調(diào)節(jié)可能是其主要機(jī)