RNAi下調(diào)胰腺癌細(xì)胞hENT-,1-的表達(dá)對(duì)氟尿嘧啶細(xì)胞毒性的影響.pdf

1、目的：研究用RNAi技術(shù)下調(diào)胰腺癌Panc-1細(xì)胞平衡型核苷載體1(human equilibrativenucleoside transporter 1，hENT<,1>)對(duì)氟尿嘧啶(5-Fluorouraci，5-FU)細(xì)胞毒性的影響。 方法：設(shè)計(jì)并合成兩個(gè)能表達(dá)特異性針對(duì)hENT<,1>的shRNA(small hairpin RNA)的DNA序列，分別與載體質(zhì)粒pSilence 4-1-CMV neo連接重組，構(gòu)建針對(duì)h

2、ENT<,1>的shRNA表達(dá)質(zhì)粒pSilence-hENT<,1>Sa和pSilence-hENT<,1>Sb。用脂質(zhì)體法將pSilence-hENT<,1>Sa和pSilence-hENT<,1>Sb轉(zhuǎn)染胰腺癌Panc-1細(xì)胞，并以含G418(600ug/ml)的培養(yǎng)液篩選陽(yáng)性轉(zhuǎn)染細(xì)胞(pSilence-hENT<,1>Sa Panc-1及pSilence-hENT<,1>Sb Panc-1)。RT-PCR檢測(cè)pSilence-hE

3、NT<,1>Sa Panc-1及pSilence-hENT<,1>Sb Panc-1細(xì)胞中hENT<,1>-mRNA的下調(diào)效果及穩(wěn)定性，選擇干擾效果較好的pSilence-hENT<,1>Sb Panc-1細(xì)胞進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)；用MTT法檢測(cè)細(xì)胞在含序列濃度5-FU(0～2×10 ng·L<'-1>)的培養(yǎng)液中48h后的生存率，并計(jì)算IC<,50>。 結(jié)果：測(cè)序顯示重組質(zhì)粒中插入片段序列正確。RT-PCR結(jié)果顯示pSilence-hE