GRP78表達(dá)下調(diào)對(duì)肺腺癌細(xì)胞耐藥的影響.pdf

1、目的：采用RT-PCR、免疫熒光細(xì)胞化學(xué)等分子生物學(xué)技術(shù)，檢測(cè)在Ca2+鏊合劑BAPTA-AM作用下人肺腺癌細(xì)胞SPCA1糖調(diào)節(jié)蛋白78(GRP78)的表達(dá)水平，并分析GRP78表達(dá)下調(diào)對(duì)肺腺癌細(xì)胞對(duì)VP-16耐藥的影響。 方法：將一定密度、生長(zhǎng)狀態(tài)良好的SPCA1細(xì)胞隨機(jī)分為抑制組(加入BAPTA-AM，濃度為0、10、20、30、40、50μM)、誘導(dǎo)組(加入A23187，濃度為2μM)及對(duì)照組(加入PBS)。采用RT-PC

2、R、免疫熒光細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)各組細(xì)胞中GRP78在核酸和蛋白水平的表達(dá)。再向各組細(xì)胞中加入化療藥物VP-16(濃度為30μM)，利用流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞生存率。根據(jù)GRP78的表達(dá)水平與細(xì)胞對(duì)VP-16的生存率，分析GRP78在肺腺癌細(xì)胞對(duì)VP-16耐藥中的作用。 結(jié)果：BAPTA-AM可抑制人肺腺癌細(xì)胞SPCA1 GRP78的表達(dá)，且GRP78表達(dá)水平與BAPTA-AM具有一定的濃度依賴性。抑制組的熒光強(qiáng)度明顯弱與誘導(dǎo)組和對(duì)照組

3、。A23187在基因和蛋白水平均能誘導(dǎo)GRP78的表達(dá)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率結(jié)果顯示：抑制組細(xì)胞凋亡率高于對(duì)照組和誘導(dǎo)組，而誘導(dǎo)組細(xì)胞凋亡率最低。 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明：BAPTA-AM能夠抑制人肺腺癌細(xì)胞SPCA1核酸和蛋白水平GRP78的表達(dá)，而A23187能夠誘導(dǎo)GRP78表達(dá)。GRP78表達(dá)程度與VP-16作用下細(xì)胞的凋亡率具有相關(guān)性，GRP78表達(dá)越高，細(xì)胞生存率越高。這表明GRP78能夠提高SPCA1細(xì)胞對(duì)V