KAI1基因轉(zhuǎn)染人胰腺癌細胞的蛋白表達及增殖能力的研究.pdf

1、KAI1基因是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種與腫瘤轉(zhuǎn)移抑制有關(guān)的基因,又稱CD82分子.該基因?qū)δ[瘤轉(zhuǎn)移的這種抑制作用已引起廣大學者的關(guān)注,因此探討KAI1基因抑制胰腺癌轉(zhuǎn)移的有關(guān)機制具有重要的實際意義.方法 人胰腺癌細胞系MiaPacaII為實驗細胞,在含10﹪胎牛血清的DMEM完全培養(yǎng)液中,37℃和5℃CO<,2>條件下培養(yǎng),約3天換液一次,并以0.25﹪的胰蛋白酶消化傳代.采用指質(zhì)體介導法將含有目的基因的載體pCMV-KAI1導入上述細胞系中

2、,同時以空載體pCMV-neo為陰性對照,并以G418 400μg/ml進行陽性篩選.用SP免疫細胞化學方法,以MiaPacaII細胞為空白對照,pCMV-MiaPacaII細胞作陰性對照,結(jié)腸癌組織作陽性對照來檢測轉(zhuǎn)染pCMV-KAI1、pCMV-neo及未轉(zhuǎn)染MiaPacaII細胞的CD82表達.在確定轉(zhuǎn)染成功之后,用MTT(四唑藍)法及集落形成實驗檢測該細胞系在轉(zhuǎn)染前后其增殖能力的改變,以探討KAI1基因?qū)σ认侔┘毎鲋衬芰Φ挠绊?/p>

3、.結(jié)論①重組KAI1基因轉(zhuǎn)染人胰腺癌高轉(zhuǎn)移細胞系MiaPacaII后,不僅可明顯的抑制其生長,而且還可表達其翻譯的KAI1/CD82蛋白質(zhì).②通過MTT實驗和集落形成實驗說明KAI1基因?qū)胍认侔┘毎岛?其增殖能力較轉(zhuǎn)染前及轉(zhuǎn)染空載體pCMV-neo者下降,這也可能使細胞系的侵襲轉(zhuǎn)移能力降低,進而使其惡性程度下降.③這些實驗將為今后利用KAI1基因在胰腺癌基因治療等方法提供理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù).④脂質(zhì)體介導的KAI1基因轉(zhuǎn)染入胰腺癌細胞