斑蝥素抑制人胰腺癌細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)其凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景和目的: 斑蝥素(Cantharidin)是傳統(tǒng)中藥斑蝥中提取的活性成份，已被用于肝癌、胃癌的臨床治療。近年來(lái)的許多研究證實(shí)，它對(duì)多種腫瘤細(xì)胞具有較強(qiáng)的殺傷和抑制作用，但至今尚未見(jiàn)其單獨(dú)作用于胰腺癌的報(bào)道。本研究旨在從體內(nèi)體外兩個(gè)水平觀察斑蝥素是否具有抑制人胰腺癌細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)其凋亡的作用，初步探討其可能的作用機(jī)制。 方法: 1．斑蝥素抑制人胰腺癌細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)其凋亡的體外研究部分①應(yīng)用MTT法檢測(cè)斑蝥素

2、對(duì)胰腺癌細(xì)胞株sw1990增殖的影響。 ②采用流式細(xì)胞術(shù)、電鏡、TUNEL法、Hoechst染色的方法檢測(cè)斑蝥素對(duì)sw1990細(xì)胞凋亡的影響。 ③提取sw1990細(xì)胞RNA和蛋白分別采用RT-PCR, western blot方法檢測(cè)凋亡相關(guān)基因(bcl-2,bax,p53,caspase-3)的表達(dá)。 2．斑蝥素抑制裸鼠移植瘤胰腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的研究部分①檢測(cè)斑蝥素對(duì)裸鼠移植瘤生長(zhǎng)的影響。 ②采用組織芯片技

3、術(shù)和免疫組化方法，檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白bcl-2,bax,p53,caspase-3的表達(dá)。 結(jié)果: 1．斑蝥素誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞凋亡的體外研究部分 ① MTT法結(jié)果示，斑蝥素在體外明顯抑制人胰腺癌sw1990細(xì)胞的生長(zhǎng)，此效應(yīng)呈時(shí)間和劑量依賴性。 ②斑蝥素作用后，形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)典型的凋亡細(xì)胞，Hoechst 33258熒光強(qiáng)染、TUNEL標(biāo)記陽(yáng)性,流式細(xì)胞儀AnnexinV-FITC/PI雙染法顯示凋亡細(xì)胞比率

4、增高。 ③ RT-PCR和western blot檢測(cè)可見(jiàn)用藥組bax、p53、caspase-3表達(dá)上調(diào)，而bcl-2的表達(dá)明顯下調(diào)。 2．斑蝥素抑制裸鼠移植瘤胰腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的研究部分 ①用藥組移植瘤體積增長(zhǎng)幅度明顯小于對(duì)照組，用藥組移植瘤重量小于對(duì)照組，差異具有顯著性。 ②免疫組化結(jié)果顯示用藥組p53、caspase-3表達(dá)明顯上調(diào)，而bcl-2/bax的表達(dá)明顯下調(diào)。 結(jié)論: 在體外