肉桂醛氧氟沙星酰腙誘導(dǎo)人胰腺癌細(xì)胞凋亡作用的研究.pdf

1、胰腺癌是臨床發(fā)病隱匿、發(fā)展迅速、預(yù)后極差的一種惡性腫瘤。受胰腺與周圍組織及器官的解剖學(xué)關(guān)系的影響，早期發(fā)生周圍組織、器官侵犯和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。由于早期無(wú)明顯的特異性癥狀和體征，并缺乏可靠的早期診斷方法，確診時(shí)多屬晚期，預(yù)后極差，約有83 ％的患者1年內(nèi)死亡。目前認(rèn)為早期手術(shù)切除是胰腺癌唯一的可治愈性方法，但85％的胰腺癌患者就診時(shí)已屬晚期或發(fā)生轉(zhuǎn)移，手術(shù)切除率僅10％-15％，因此化療在胰腺癌綜合治療中尚占有重要的位置，需要研究開發(fā)新的藥物以

2、改善療效。
　　 喹諾酮類化合物是臨床常用的抗菌藥物，這類藥物作用于細(xì)菌DNA 回旋酶（gyrase），抑制細(xì)菌DNA 復(fù)制、轉(zhuǎn)錄及損傷修復(fù)等過程，抑制細(xì)菌增殖并殺滅細(xì)菌，臨床應(yīng)用效果良好。由于真核細(xì)胞的拓?fù)湟謽?gòu)酶Ⅱ（topoisomeraseⅡ,TopoⅡ）與細(xì)菌DNA 回旋酶的活性部位酪氨酸殘基周圍的序列具有同源性，二者催化功能相似。因此，人們希望通過結(jié)構(gòu)改造能夠合成抑制哺乳動(dòng)物拓?fù)湟謽?gòu)酶Ⅱ活性的喹諾酮類抗腫瘤藥物。本研究利

3、用酰胺類化合物取代氟喹諾酮羧酸的C-3 羧基合成的氧氟沙星C-3 酰腙衍生物，探討該類化合物對(duì)人胰腺癌BxPC-3 細(xì)胞的增殖抑制和促凋亡作用，以期篩選出治療胰腺癌的候選藥物，并為進(jìn)一步開發(fā)和利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 目的：通過對(duì)13種喹諾酮衍生物的初步篩查，尋找對(duì)人胰腺癌BxPC-3細(xì)胞增殖有顯著抑制作用的化合物，對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行初步研究，為該類化合物的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。
　　 方法：MTT法檢測(cè)化合物對(duì)BxPC-

4、3 增殖的抑制作用；Hoechst33258/PI染色熒光顯微鏡觀察細(xì)胞凋亡核形變化；TUNEL法觀察細(xì)胞凋亡并檢測(cè)細(xì)胞凋亡率；DNA 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)凋亡細(xì)胞特征性梯狀DNA條帶；Western-blot檢測(cè)細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的變化。
　　 結(jié)果：MTT法測(cè)定13種化合物對(duì)胰腺癌細(xì)胞株BxPC-3 細(xì)胞增殖的抑制作用。其中FQ4、FQ16兩種化合物對(duì)該細(xì)胞增殖具有顯著的抑制作用，在0.625μmol·L-1 ～10μmol

5、·L-1的濃度范圍內(nèi)能顯著抑制細(xì)胞增殖。FQ16 對(duì)BxPC-3細(xì)胞增殖抑制作用最強(qiáng)且呈濃度、時(shí)間依賴關(guān)系，作用于細(xì)胞24h的IC50值是4.00μmol·L-1；Hoechst33258/PI 熒光染色觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，顯示凋亡細(xì)胞染色質(zhì)凝集、細(xì)胞核碎裂和凋亡小體形成等典型細(xì)胞凋亡特征性變化，晚期凋亡細(xì)胞可見PI染色。FQ16 達(dá)4.00-6.37 μmol·L-1 濃度作用細(xì)胞24h，DNA 瓊脂糖凝膠電泳顯示凋亡細(xì)胞典型的梯狀D

6、NA條帶。TUNEL 實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)細(xì)胞凋亡率顯著高于對(duì)照組（P﹤0.05）；Western blot 結(jié)果顯示，p53、bax、caspase-8、caspase-9和caspase-3蛋白量表達(dá)較對(duì)照組升高，bcl-2蛋白表達(dá)量降低。Caspase-8、caspase-9活性裂解片段顯著增加，線粒體細(xì)胞色素c 降低，胞漿細(xì)胞色素c 升高。
　　 結(jié)論：
　　 1.FQ16 顯著抑制胰腺癌BxPC-3 細(xì)胞增殖作用，其抑制作