肉桂醛氧氟沙星酰腙誘導(dǎo)人胰腺癌細胞凋亡作用的研究.pdf

1、胰腺癌是臨床發(fā)病隱匿、發(fā)展迅速、預(yù)后極差的一種惡性腫瘤。受胰腺與周圍組織及器官的解剖學(xué)關(guān)系的影響，早期發(fā)生周圍組織、器官侵犯和遠處轉(zhuǎn)移。由于早期無明顯的特異性癥狀和體征，并缺乏可靠的早期診斷方法，確診時多屬晚期，預(yù)后極差，約有83 ％的患者1年內(nèi)死亡。目前認為早期手術(shù)切除是胰腺癌唯一的可治愈性方法，但85％的胰腺癌患者就診時已屬晚期或發(fā)生轉(zhuǎn)移，手術(shù)切除率僅10％-15％，因此化療在胰腺癌綜合治療中尚占有重要的位置，需要研究開發(fā)新的藥物以

2、改善療效。
　　 喹諾酮類化合物是臨床常用的抗菌藥物，這類藥物作用于細菌DNA 回旋酶（gyrase），抑制細菌DNA 復(fù)制、轉(zhuǎn)錄及損傷修復(fù)等過程，抑制細菌增殖并殺滅細菌，臨床應(yīng)用效果良好。由于真核細胞的拓撲抑構(gòu)酶Ⅱ（topoisomeraseⅡ,TopoⅡ）與細菌DNA 回旋酶的活性部位酪氨酸殘基周圍的序列具有同源性，二者催化功能相似。因此，人們希望通過結(jié)構(gòu)改造能夠合成抑制哺乳動物拓撲抑構(gòu)酶Ⅱ活性的喹諾酮類抗腫瘤藥物。本研究利

3、用酰胺類化合物取代氟喹諾酮羧酸的C-3 羧基合成的氧氟沙星C-3 酰腙衍生物，探討該類化合物對人胰腺癌BxPC-3 細胞的增殖抑制和促凋亡作用，以期篩選出治療胰腺癌的候選藥物，并為進一步開發(fā)和利用提供實驗依據(jù)。
　　 目的：通過對13種喹諾酮衍生物的初步篩查，尋找對人胰腺癌BxPC-3細胞增殖有顯著抑制作用的化合物，對其作用機制進行初步研究，為該類化合物的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。
　　 方法：MTT法檢測化合物對BxPC-

4、3 增殖的抑制作用；Hoechst33258/PI染色熒光顯微鏡觀察細胞凋亡核形變化；TUNEL法觀察細胞凋亡并檢測細胞凋亡率；DNA 瓊脂糖凝膠電泳檢測凋亡細胞特征性梯狀DNA條帶；Western-blot檢測細胞凋亡相關(guān)蛋白表達的變化。
　　 結(jié)果：MTT法測定13種化合物對胰腺癌細胞株BxPC-3 細胞增殖的抑制作用。其中FQ4、FQ16兩種化合物對該細胞增殖具有顯著的抑制作用，在0.625μmol·L-1 ～10μmol

5、·L-1的濃度范圍內(nèi)能顯著抑制細胞增殖。FQ16 對BxPC-3細胞增殖抑制作用最強且呈濃度、時間依賴關(guān)系，作用于細胞24h的IC50值是4.00μmol·L-1；Hoechst33258/PI 熒光染色觀察細胞形態(tài)學(xué)變化，顯示凋亡細胞染色質(zhì)凝集、細胞核碎裂和凋亡小體形成等典型細胞凋亡特征性變化，晚期凋亡細胞可見PI染色。FQ16 達4.00-6.37 μmol·L-1 濃度作用細胞24h，DNA 瓊脂糖凝膠電泳顯示凋亡細胞典型的梯狀D

6、NA條帶。TUNEL 實驗統(tǒng)計細胞凋亡率顯著高于對照組（P﹤0.05）；Western blot 結(jié)果顯示，p53、bax、caspase-8、caspase-9和caspase-3蛋白量表達較對照組升高，bcl-2蛋白表達量降低。Caspase-8、caspase-9活性裂解片段顯著增加，線粒體細胞色素c 降低，胞漿細胞色素c 升高。
　　 結(jié)論：
　　 1.FQ16 顯著抑制胰腺癌BxPC-3 細胞增殖作用，其抑制作