SRp20蛋白與雷公藤甲素誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞凋亡的相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　1.研究SRp20蛋白在胰腺癌細(xì)胞的表達(dá)情況；
　　2.研究雷公藤甲素（Triptolid，簡稱TPL）誘導(dǎo)人胰腺癌細(xì)胞凋亡作用與SRp20蛋白的相關(guān)性；
　　3.探討SRp20蛋白與雷公藤甲素誘導(dǎo)胰腺細(xì)胞凋亡p53相關(guān)途徑的機(jī)制。
　　方法：
　　1.取含10％胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)液培養(yǎng)胰腺癌細(xì)胞株HPDE6-C7、AsPC-1、PANC-1和Bxpc-3，傳代至10-20代的對數(shù)期細(xì)胞

2、進(jìn)行實(shí)驗(yàn)；
　　2.采用MTT法與Annexin V-FITC/PI雙染流式細(xì)胞術(shù)檢測TPL對AsPC-1胰腺癌細(xì)胞增殖抑制及凋亡的影響；
　　3.應(yīng)用Western blot檢測：
　?、貶PDE6-C7、AsPC-1、BxPC-3和PANC-1細(xì)胞內(nèi)SRp20蛋白的表達(dá)水平并應(yīng)用相對定量法分析各細(xì)胞組SRp20的表達(dá)性差異；
　?、贏sPC-1細(xì)胞胞內(nèi)SRp20、p53、p53β和Bax蛋白的表達(dá)水平，并應(yīng)用

3、相對定量法分析比較不同實(shí)驗(yàn)處理組SRp20、p53、p53β和Bax蛋白的表達(dá)差異。
　　結(jié)果：
　　1.細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察經(jīng)TPL處理的AsPC-1細(xì)胞，加藥12.5、25、50nM/LTPL處理48h組比較無處理對照組，細(xì)胞密度明顯減少，出現(xiàn)不同程度凋亡，細(xì)胞形態(tài)不一，胞內(nèi)腫脹，出現(xiàn)空泡樣變；
　　2.MTT結(jié)果顯示使用TPL經(jīng)不同作用時間和濃度處理的AsPC-1細(xì)胞，比較無處理對照組細(xì)胞均出現(xiàn)明顯的增值抑制，其中加藥

4、24h、48h、72h各濃度組細(xì)胞均受不同程度抑制，呈時間依賴效應(yīng)，各時間組在12.5、25、50 nM/L范圍，抑制率與加藥劑量呈明顯正相關(guān)效應(yīng)，其中24h各加藥劑量組的生長抑制率分別為25.28±2.18%（12.5nM/L）、36.01±1.82%（25 nM/L）、60.03±1.67（50 nM/L）[實(shí)驗(yàn)組與對照組間，p<0.01];
　　3.FCM Annexin V-FITC、PI雙染法凋亡檢測顯示，經(jīng)不同濃度TP

5、L處理AsPC-1細(xì)胞48h，加藥12.5、25、50組凋亡比例分別為9.45±1.92、30.1±2.57%、44.23±4.36%(實(shí)驗(yàn)組與對照組間，p<0.01)，隨著TPL加藥劑量的增加凋亡比例亦明顯增加;
　　4.Westernblot印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:
　?、傧噍^于人胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞系HPDE6-C7，人胰腺癌細(xì)胞系A(chǔ)sPC-1，BxPC-3、PANG-1的SRp20蛋白表達(dá)明顯上調(diào)（實(shí)驗(yàn)組與對照組間p<0.01

6、）;
　?、谙噍^于無處理對照組，SRP20蛋白在TPL誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞AsPC-1凋亡中的表達(dá)水平明顯下調(diào)，而p53、p53β和Bax蛋白的表達(dá)水平均呈明顯上調(diào)趨勢，且SRP20的表達(dá)濃度在一定的加藥劑量范圍內(nèi)（TPL6.25~50nmol/L）存在量效與時間依賴性（實(shí)驗(yàn)組與對照組間，p<0.01），而p53、P53β和Bax蛋白的表達(dá)濃度則在一定的劑量范圍內(nèi)內(nèi)（TPL6.25~50nmol/L）存在量效依賴性（實(shí)驗(yàn)組與對照組間，p