版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、雷公藤甲素是各種雷公藤制劑的主要活性成分之一,其相關(guān)效價比雷公藤總苷高100~200倍。在發(fā)揮強(qiáng)大免疫抑制作用的同時,雷公藤甲素也是雷公藤起毒性作用的主要組成成分,從而在一定程度上限制了它的臨床應(yīng)用,尤其是系統(tǒng)給藥途徑。因此,雷公藤甲素外用給藥成為擴(kuò)大在皮膚科臨床應(yīng)用的理想選擇。醇質(zhì)體是近年來藥物傳遞系統(tǒng)中一種新的脂質(zhì)體載體,它的物理化學(xué)特性使它能更有效地運送藥物通過角質(zhì)層到達(dá)皮膚更深層。研究雷公藤甲素醇質(zhì)體的體外透皮效果及在體抗炎療效
2、,為本課題研究目的之一。同時將不同濃度的雷公藤甲素作用于體外培養(yǎng)的ECV304細(xì)胞株,觀測雷公藤甲素對ECV304細(xì)胞增殖抑制效應(yīng)及其對細(xì)胞株端粒酶活性的影響,探討雷公藤甲素對血管生成的抑制作用,為本課題研究目的之二。
課題目的:
1、本研究以制備雷公藤甲素醇質(zhì)體為研究切入點,以期充分發(fā)揮雷公藤甲素的生物活性,而降低藥物毒副作用,擴(kuò)大其在皮膚科的應(yīng)用,同時為臨床上皮膚科外用制劑研發(fā)提供新思路。
2、為了科學(xué)
3、的評價雷公藤甲素醇質(zhì)體藥效可能的機(jī)制。本研究采用Franz擴(kuò)散池檢測體外透皮效果,采用反射分光光度儀檢測雷公藤甲素醇質(zhì)體在體抗炎作用,為該藥的外用制劑臨床研究提供科學(xué)的數(shù)據(jù)。
3、為評價雷公藤甲素醇質(zhì)體活性,將不同濃度的雷公藤甲素分別地作用于體外培養(yǎng)的ECV304細(xì)胞株,觀察對ECV304細(xì)胞株的抑制增殖效應(yīng)、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用以及其對細(xì)胞株端粒酶活性的影響。
試驗方法:
1、醇質(zhì)體的制備:醇質(zhì)體制備采用薄膜
4、水化法與超聲法結(jié)合成改良的新方法。
2、醇質(zhì)體粒徑分析:采用激光動態(tài)散射儀檢測醇質(zhì)體粒徑進(jìn)行分析,測定五個不同批次的醇質(zhì)體,計算平均粒徑。
3、醇質(zhì)體的包封率(EE%):雷公藤甲素醇質(zhì)體采用超速離心法分離未包封的部分,藥物含量采用HPLC檢測。
4、體外大鼠皮膚透皮實驗:大鼠脫毛后獲得皮膚標(biāo)本,分離角質(zhì)層和有活力的表皮(SCE)用于透皮實驗,透皮研究使用Franz擴(kuò)散池。
5、藥物的HPLC檢測:
5、HPLC分析均在室溫下進(jìn)行,煙酸甲酯檢測波長為218nm,雷公藤甲素的檢測波長為219nm。
6、醇質(zhì)體制劑的大鼠在體抗炎活性:采用反射分光光度儀檢測在體抗炎作用。
7、ECV304細(xì)胞株抑制率測定:采用四甲基偶氮唑鹽比色試驗法(MTT)檢測。
8、凋亡細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察:采用倒置顯微鏡進(jìn)行觀察。
9、端粒酶活性檢測:TRAP-ELISA法,具體使用TeloTAGGGTelomerasePCRELI
6、SA端粒酶活性檢測試劑盒進(jìn)行端粒酶活性的檢測。
實驗結(jié)果:
1、本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)醇質(zhì)體的粒徑隨乙醇濃度增加而下降,隨磷脂濃度增加而增加。乙醇和磷脂量對載體的包封率有正影響,即乙醇和磷脂的量越高,醇質(zhì)體中包封的雷公藤甲素越多。雷公藤甲素是脂溶性藥物,通常脂溶性藥物的醇質(zhì)體包封率相對比較高。本試驗中發(fā)現(xiàn)在卵磷脂3%(v/v)、乙醇為30(v/v)配比下,制備的醇質(zhì)體制劑(179.4±28.9nm)粒徑最大,而在卵磷脂1-2
7、%(v/v)、乙醇為45(v/v)配比下,制劑粒徑最小(50nm左右),雷公藤甲素醇質(zhì)體中藥物包封率均超過了85%。最優(yōu)化處方的選擇采用粒徑、包封率為指標(biāo)進(jìn)行衡量,發(fā)現(xiàn)醇質(zhì)體制劑在卵磷脂為2%(v/v)、乙醇為45%(v/v)處方配比下,粒徑小、粒徑分布均勻和包封率高,雷公藤甲素醇質(zhì)體中藥物包封率達(dá)到了98%。
2、采用各種煙酸甲酯和雷公藤甲素制劑透過大鼠皮膚SCE進(jìn)入Franz擴(kuò)散池來進(jìn)行體外透皮實驗。結(jié)果顯示煙酸甲酯醇質(zhì)體
8、的24小時透皮累積量(74.0%)>空白醇質(zhì)體/煙酸甲酯水醇溶液(54.2%)>水醇溶液(31.2%)>水溶液(17.4%)。透皮延遲時間顯示,煙酸甲酯醇質(zhì)體(無)﹤空白醇質(zhì)體/水醇藥物溶液混合物﹤水醇溶液﹤水溶液;時間分別為0、1、2、3小時。統(tǒng)計分析表明,煙酸甲酯四種劑型24小時透皮累積量比較,F(xiàn)=717.5,P<0.01,有顯著性差異;兩兩比較,所有P值均<0.01,有顯著性差異。雷公藤甲素各種制劑的通過SCE的體外透皮結(jié)果與煙酸
9、甲酯的透皮相似。24小時透皮累積量的結(jié)果顯示,雷公藤甲素醇質(zhì)體達(dá)83.7%、空白醇質(zhì)體/雷公藤甲素水醇溶液達(dá)59.4%、而水醇溶液達(dá)36.8%。透皮延遲時間分別為水醇溶液2h、空白醇質(zhì)體/水醇藥物溶液混合物1h、雷公藤甲素醇質(zhì)體無。統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn),雷公藤甲素三種劑型的24小時透皮累積量比較,F(xiàn)=170.3,P<0.01,有顯著性差異;兩兩較,所有P值均<0.01,有顯著性差異。
3、研究采用一種反射分光光度法來評價外用空白醇質(zhì)體
10、可能引起的紅斑。結(jié)果顯示,空白醇質(zhì)體的ΔEI與生理鹽水溶液(對照)比較沒有顯著性差異,而水-乙醇混合溶液與醇質(zhì)體制劑或生理鹽水溶液相比有顯著性差異(6h,24h,48h的F值分別為1562.7、1034.3、2814.6,p值均<0.01)。煙酸甲酯醇質(zhì)體(此醇質(zhì)體是未分離游離藥物的煙酸甲酯醇質(zhì)體)與其水醇溶液或者水溶液相比,以特別的高ΔEI值為特點,而且早期出現(xiàn)明顯紅斑,由煙酸甲酯醇質(zhì)體引起的紅斑指數(shù)變化曲線中可見,在1小時處產(chǎn)生一個
11、峰,而后長達(dá)10小時內(nèi)恒定。
4、采用不同皮膚位點用煙酸甲酯制劑進(jìn)行預(yù)處理誘發(fā)紅斑,然后應(yīng)用雷公藤甲素制劑,隨之出現(xiàn)紅斑消退現(xiàn)象。結(jié)果顯示,雷公藤甲素醇質(zhì)體比雷公藤甲素非醇質(zhì)體溶液能更快地使紅斑消退。煙酸甲酯制劑后,使用雷公藤甲素醇質(zhì)體制劑處理3小時后的位點上發(fā)現(xiàn)誘發(fā)的紅斑完全消退;水-乙醇混合溶液和雷公藤甲素的水溶液處理后的位點可見有誘發(fā)紅斑的存在。實驗中,同時采用空白醇質(zhì)體進(jìn)行觀測醇質(zhì)體制劑中的組分可能對化學(xué)誘發(fā)性紅斑的干
12、擾作用,結(jié)果發(fā)現(xiàn)空白醇質(zhì)體沒有誘發(fā)紅斑的作用,同時空白醇質(zhì)也無抗炎活性。
5、MTT實驗結(jié)果顯示,ECV304細(xì)胞經(jīng)不同濃度(5ug/L、10ug/L、20ug/L、30ug/L)的雷公藤甲素處理后,培養(yǎng)48小時后,ECV304細(xì)胞實驗組與對照組相比均有不同程度的生長減緩,增殖受到不同程度的抑制。雷公藤甲素在試驗濃度(5~30ug/L)內(nèi)對ECV304細(xì)胞的細(xì)胞增殖具有明顯的抑制作用,在一定范圍內(nèi)呈明顯的濃度依賴性,即隨著藥物
13、濃度的升高而其抑制率也增加。
6、光鏡下細(xì)胞形態(tài)學(xué)顯示:5ug/L雷公藤甲素處理后,ECV304細(xì)胞鏡下觀察單位面積的細(xì)胞數(shù)量出現(xiàn)輕度的減少。在高濃度(30ug/L)作用后,鏡下ECV304細(xì)胞單位面積的細(xì)胞數(shù)量顯著減少,細(xì)胞間連接變少甚至消失,細(xì)胞間隙增大;細(xì)胞形態(tài)變圓或者外觀形狀不規(guī)則,細(xì)胞體積變小,胞膜呈現(xiàn)皺縮,胞漿減少,細(xì)胞核出現(xiàn)固縮,染色質(zhì)聚集于細(xì)胞壁的邊緣,部分呈月牙樣,有些細(xì)胞裂解成為碎片狀。尤其在高濃度狀態(tài)時,
14、上述鏡下改變更為明顯。未加雷公藤甲素處理的細(xì)胞無明顯變化,僅出現(xiàn)少量的細(xì)胞漂浮。
7、TRAP-ELISA法分別檢測經(jīng)不同濃度(5ug/L、10ug/L、20ug/L、30ug/L)處理的雷公藤甲素作用的ECV304細(xì)胞(48小時)的端粒酶活性。與對照組相比,各個處理組均受到明顯的抑制,且隨藥物濃度的增加,抑制作用逐漸增強(qiáng)。各加藥組與對照組在統(tǒng)計學(xué)上有顯著性差異(P<0.01),實驗組(5ug/L、10ug/L、20ug/L、
15、30ug/L)之間亦有統(tǒng)計學(xué)顯著性差異(P<0.01)。
結(jié)論:
1、采用薄膜水化法與超聲法結(jié)合技術(shù)制備的醇質(zhì)體,具有包封率高、透皮率好的優(yōu)點,尤其適合脂質(zhì)體藥物載體。
2、最優(yōu)化處方顯示,雷公藤甲素醇質(zhì)體制劑在卵磷脂為2%(v/v)、乙醇為45%(v/v)處方配比下,粒徑相對較?。?0nm左右)、粒徑分布比較均勻、包封率高(達(dá)到了98%)。
3、醇質(zhì)體既沒有誘發(fā)紅斑作用也沒有抗炎活,雷公藤甲素醇
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 雷公藤甲素脂質(zhì)體的制備及質(zhì)量的初步研究.pdf
- 雷公藤甲素聚多肽脂質(zhì)體的制備與評價.pdf
- 雷公藤甲素外用凝膠的研制.pdf
- 雷公藤甲素脂質(zhì)納米粒研究.pdf
- 雷公藤甲素對黑素細(xì)胞黑素合成的影響.pdf
- 雷公藤甲素抗血管生成的作用及機(jī)理研究.pdf
- 雷公藤甲素、雷公藤紅素對外周血單個核細(xì)胞干擾素刺激基因表達(dá)的影響.pdf
- 雷公藤甲素誘導(dǎo)凋亡作用及其機(jī)制初步探討.pdf
- 高效液相色譜法測定雷公藤甲素及在雷公藤制劑研究中的應(yīng)用.pdf
- 雷公藤甲素聚合物納米粒的傳輸體系研究.pdf
- 雷公藤甲素和雷公藤紅素涂膜劑對銀屑病小鼠模型的影響.pdf
- 不同套種模式對雷公藤林地土壤養(yǎng)分、雷公藤甲素及光合特性影響研究.pdf
- 雷公藤甲素納米凝膠的構(gòu)建及其透皮轉(zhuǎn)運機(jī)制研究.pdf
- 脒修飾的載雷公藤甲素陽離子脂質(zhì)體的腎小球靶向給藥系統(tǒng)研究.pdf
- 雷公藤甲素抑制結(jié)腸癌細(xì)胞增殖的機(jī)制研究.pdf
- 基于質(zhì)譜的雷公藤甲素肝臟毒性代謝組學(xué)研究.pdf
- 雷公藤甲素作用于tRXR靶點的抗癌機(jī)制.pdf
- 雷公藤甲素對t(8;21)白血病的作用實驗研究.pdf
- 基于鞘脂代謝組學(xué)雷公藤甲素和雷公藤多苷片藥效和毒性作用研究.pdf
- miRNAs在雷公藤甲素抗肝癌效應(yīng)中的作用及機(jī)制研究.pdf
評論
0/150
提交評論