雷公藤甲素抗血管生成的作用及機理研究.pdf

1、血管生成是源于已有的毛細(xì)血管和后微靜脈的新毛細(xì)血管的形成。血管生成的過程主要包括：血管基底膜的降解，血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移、增殖以及毛細(xì)血管管腔的形成。近來提出，控制新生血管的生成是一條新的治療血管生成相關(guān)疾病的有效途徑。血管內(nèi)皮細(xì)胞是針對血管生成治療的主要靶點。已有研究發(fā)現(xiàn)雷公藤甲素具有抗腫瘤、抗炎、抗生育和調(diào)節(jié)免疫等的作用，但其抑制血管生成的作用和機制尚不明確。本研究利用體外培養(yǎng)人臍靜(humanumbilicalveinendothe

2、lialcell，HUVEC)，傳至第三代，加入不同濃度的雷公藤甲素(0，5，10，20，30μg/L)、地塞米松(300mg/L)后培養(yǎng)不同時間，計數(shù)細(xì)胞來繪制細(xì)胞生長曲線；采用[3H]-TdR摻入法和MTT還原法來反映細(xì)胞的增殖情況；瓊脂糖凝膠培養(yǎng)檢測內(nèi)皮細(xì)胞的遷移活性；膠原膠上三維培養(yǎng)觀察小管結(jié)構(gòu)形成情況；利用雞胚尿囊膜在體觀察雷公藤甲素對血管生成的影響；免疫組織化學(xué)方法檢測內(nèi)皮細(xì)胞尿激酶型纖溶酶原激活物(urokinase-ty

3、peplasminogenactivator，u-PA)和組織纖溶酶原激活物(tissue-plasminogenactivator，t-PA)的蛋白表達量，并進一步采用熒光定量RT-PCR觀察雷公藤甲素在mRNA水平對u-PA表達的影響。結(jié)果顯示，雷公藤甲素可明顯抑制內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，并且呈劑量依賴性，5μg/L雷公藤甲素的抑制率達28.93％，作用效果強于300mg/L地塞米松；明顯抑制內(nèi)皮細(xì)胞的遷移活性，使細(xì)胞遷移距離縮短，5μg/

4、L雷公藤甲素即使細(xì)胞遷移距離縮短約20％；抑制三維培養(yǎng)中HUVEC形成小管結(jié)構(gòu)；抑制雞胚尿囊膜的血管生成(P＜0.05)，使新生血管的數(shù)目顯著減少；減少內(nèi)皮細(xì)胞u-PA、t-PA的蛋白表達，并呈劑量依賴趨勢，5μg/L雷公藤甲素即可使內(nèi)皮細(xì)胞u-PA、t-PA表達降低41.05％和43.64％；下調(diào)HUVECu-PAmRNA的表達。因此認(rèn)為，雷公藤甲素可有效抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、移行，從而發(fā)揮明確的抑制血管生成的作用；雷公藤甲素降低內(nèi)