蜂蜜中雷公藤甲素檢測(cè)方法及貯藏過(guò)程中降解規(guī)律研究.pdf

1、蜂蜜作為天然甜味食品，因具有良好營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和保健功能深受人們喜愛(ài)。但是近年來(lái)，在我國(guó)南方部分省市，陸續(xù)報(bào)道爆發(fā)了多起因食用蜂蜜而中毒的事件，使人們對(duì)蜂蜜的安全性產(chǎn)生了一定的擔(dān)憂(yōu)。本研究通過(guò)對(duì)疑似有毒蜂蜜樣本的分析，發(fā)現(xiàn)這些樣本含有一定濃度的雷公藤甲素。雷公藤甲素是雷公藤屬植物中特有的成分，具有較強(qiáng)的生理活性及毒性，鑒于此，可以將雷公藤甲素作為有毒蜂蜜潛在的特征標(biāo)志物之一，用于鑒別有毒蜂蜜并可作為快速診斷有毒蜂蜜中毒患者的依據(jù)。建立蜂蜜中雷

2、公藤甲素的高靈敏度和特異性檢測(cè)方法，是開(kāi)展疑似有毒蜂蜜鑒別及其風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的技術(shù)保障。目前蜂蜜中雷公藤甲素檢測(cè)方法相對(duì)匱乏，為此，本論文通過(guò)優(yōu)化不同的樣品前處理過(guò)程，利用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行測(cè)定，建立了兩種不同蜂蜜中雷公藤甲素的檢測(cè)方法，并基于建立的檢測(cè)方法考察了蜂蜜中雷公藤甲素在不同貯藏溫度下的降解情況。主要研究結(jié)果為以下三部分。
　　1.通過(guò)優(yōu)化儀器參數(shù)（如流動(dòng)相、色譜柱等參數(shù)，以及質(zhì)譜的碰撞電壓、離子對(duì)等參數(shù)）建立雷公藤

3、甲素的儀器條件。優(yōu)化樣品前處理過(guò)程（提取溶劑、凈化劑等）建立蜂蜜中雷公藤甲素定量分析的前處理方法。最終選取乙酸乙酯為提取劑，采用兩步提取合并提取液的提取方法從蜂蜜中提取出雷公藤甲素，利用自配的凈化劑組合包（C18、PSA、中性氧化鋁）進(jìn)行凈化，并上機(jī)分析測(cè)定。結(jié)果表明:雷公藤甲素在5.0～1000.0μg/L范圍內(nèi)的線(xiàn)性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)大于0.999。在5.0，10.0，50.0，100.0μg/kg四個(gè)濃度水平下進(jìn)行添加回收率試驗(yàn)，

4、雷公藤甲素的基質(zhì)回收率在80％～102％范圍內(nèi)，日內(nèi)RSD小于8％，日間RSD不超過(guò)13％，方法的定量限為5.0μg/kg，檢出限為2.0μg/kg。這表明本章所建立的方法可用于蜂蜜中雷公藤甲素的定性和定量分析，且方法具有定性和定量準(zhǔn)確、穩(wěn)定，操作簡(jiǎn)便的特點(diǎn)。
　　2.建立柱前衍生/超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定蜂蜜中雷公藤甲素的定量分析方法。本部分主要是基于改進(jìn)QuEChERS的前處理方法，對(duì)雷公藤甲素的衍生化條件（衍生劑、衍生溫

5、度、衍生時(shí)間、衍生劑濃度等）進(jìn)行優(yōu)化，最終確定樣品前處理過(guò)程。并對(duì)雷公藤甲素衍生物的儀器方法進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明:雷公藤甲素衍生物添加入蜂蜜空白基質(zhì)中而繪制成的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)在1.0-100.0μg/mL范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。加標(biāo)回收試驗(yàn)通過(guò)基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)定量發(fā)現(xiàn)，在三個(gè)濃度1.0，10.0，100.0μg/mL添加水平下，蜂蜜中雷公藤甲素的回收率范圍在79％～94％之間，精密度為2.9％～5.8％，準(zhǔn)確度為6.9％～10.3％，定量限1.0μ

6、g/kg，檢出限0.3μg/kg。因此本方法不僅定量限低，而且穩(wěn)定可靠，可用于準(zhǔn)確定性和定量分析蜂蜜中的雷公藤甲素。
　　3.研究了雷公藤甲素以及其在蜂蜜貯藏過(guò)程中的降解規(guī)律，試驗(yàn)表明不管是否有蜂蜜基質(zhì)的存在，雷公藤甲素的降解規(guī)律和溫度有密切關(guān)系，其降解速度隨溫度的升高而加快。在日常生活中，蜂蜜往往是放置于35℃、20℃、4℃這三種溫度條件下的，通過(guò)試驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)蜂蜜中的雷公藤甲素在35℃條件下放置了六個(gè)月，其濃度降解了約50％;