雷公藤甲素對MV4-11細胞的增殖影響及RAS-ERK-MAPK通路相關機制研究.pdf

1、目的：
　　觀察雷公藤甲素（TP）對FLT3-ITD突變陽性急性髓系白血?。ˋML）細胞株MV4-11的增殖抑制和促凋亡作用，并檢測RAS/ERK/MAPK通路上相關基因的表達，探討其可能的抗白血病作用機制，為雷公藤甲素應用于FLT3-ITD突變陽性AML的臨床治療提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　采用不同濃度的TP分別處理MV4-11細胞株，在不同的時間點，采用四甲基偶氮唑藍（MTT）法檢測細胞的增殖抑制率，用Anne

2、xin V-FITC/PI染色流式細胞術檢測細胞的凋亡率，實時熒光定量聚合酶鏈式反應（RT-PCR）檢測FLT3、RAS、ERK、FOXM1、c-Myc的mRNA表達水平。
　　結果：
　　1.MTT法檢測并計算不同濃度的TP分別作用于MV4-11細胞24h、48h和72h的增殖抑制率，觀察到TP對MV4-11細胞有明顯的增殖抑制作用，且隨著藥物濃度的增加及作用時間的延長，其增殖抑制率呈逐漸增高趨勢，存在明顯的劑量-時間依賴

3、性。TP作用于MV4-11細胞24h、48h和72h的IC50值分別為56.86、16.59、3.42nmol/L。
　　2.流式細胞術檢測0、10、20 nmol/L的TP分別作用于MV4-11細胞后，48h的凋亡率分別為（4.47±0.25）％、（17.30±0.56）%、（35.77±0.55）%，72h的凋亡率分別為(6.80±0.66）%、（49.83±0.45）%、（68.90±0.75）%。并觀察到隨著TP的濃度增高

4、或作用時間延長，凋亡率逐漸增加，呈時間-劑量依賴性。
　　3.熒光定量PCR檢測0、10、20nmol/L的TP分別作用于MV4-11細胞48h后，F(xiàn)LT3mRNA的表達明顯下降，同時RAS、ERK、FOXM1、c-Myc的mRNA的表達均降低，且隨著TP藥物濃度的增高，各基因的相對表達量均逐漸下降，也存在劑量依賴性。
　　結論：
　　雷公藤甲素作用于FLT3-ITD突變陽性急性髓系白血病細胞株MV4-11后，能明顯抑