PP2A抑制劑通過Wnt-β-catenin信號(hào)通路抑制胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1遷移和增殖的機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　斑蝥素(Cantharidin)是傳統(tǒng)抗癌中藥斑蝥的活性成分,且為蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase2A,PP2A)的選擇性抑制劑。PP2A可以使諸多激酶去磷酸化而失活,由于激酶通路的激活通常會(huì)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長,因此PP2A被認(rèn)為是抑癌因子,而PP2A抑制劑被認(rèn)為是誘癌劑。然而研究發(fā)現(xiàn)PP2A抑制劑Cantharidin和岡田酸(Okadaic acid,OA)對(duì)胰腺癌細(xì)胞的生長有顯著抑制作用,而對(duì)

2、其遷移的作用尚不清楚。β-catenin是Wnt/β-catenin信號(hào)通路的關(guān)鍵蛋白,PP2A可使β-catenin去磷酸化而激活Wnt/β-catenin通路,PP2A抑制劑可促進(jìn)β-catenin磷酸化而阻斷Wnt/β-catenin信號(hào)通路。激活Wnt通路在某些情況下可誘導(dǎo)遷移和增殖,因此在本研究中,我們擬驗(yàn)證PP2A抑制劑是否通過Wnt/β-catenin通路對(duì)胰腺癌細(xì)胞的遷移和增殖產(chǎn)生抑制作用。
　　方法:
　　

3、1、用四種不同方式處理 PANC-1細(xì)胞,分別為:對(duì)照組,PP2A抑制劑處理組, Wnt/β-catenin通路抑制劑處理組,Wnt/β-catenin通路抑制劑與PP2A抑制劑聯(lián)合處理組。
　　2、應(yīng)用劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Cantharidin對(duì)胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1遷移能力的影響。
　　3、應(yīng)用Western blot法檢測(cè)PP2A抑制劑對(duì)Wnt/β-catenin通路的作用。
　　4、應(yīng)用劃痕和MTT法檢測(cè)Cantha

4、ridin、去甲斑蝥素(Norcantharidin)和OA通過Wnt/β-catenin通路對(duì)胰腺癌細(xì)胞遷移和增殖能力的影響。
　　5、應(yīng)用基因芯片和real-time PCR技術(shù)檢測(cè)Cantharidin和OA對(duì)Wnt/β-catenin通路下游基因表達(dá)的調(diào)控。
　　結(jié)果:
　　1. Cantharidin可抑制胰腺癌細(xì)胞系PANC-1的遷移能力。
　　2. Cantharidin等PP2A抑制劑可介導(dǎo)β-c

5、atenin持續(xù)磷酸化降解,入核減少,提示PP2A抑制劑可下調(diào)胰腺癌細(xì)胞中Wnt/β-catenin通路的活性。
　　3. Wnt/β-catenin通路抑制劑FH535能削弱PP2A抑制劑對(duì)胰腺癌細(xì)胞遷移和增殖的抑制作用,說明PP2A抑制劑對(duì)胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1遷移和增殖的作用有可能依賴于Wnt/β-catenin信號(hào)通路。
　　4. PP2A抑制劑可調(diào)控Wnt/β-catenin通路下游基因的表達(dá)。
　　5.