基質(zhì)金屬蛋白酶-7通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞離解參與調(diào)控胰腺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制.pdf

1、診斷胰腺癌時(shí)，通常已出現(xiàn)局部或遠(yuǎn)隔轉(zhuǎn)移，以至于無(wú)法進(jìn)行根治性手術(shù)治療。目前胰腺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制尚未完全明確。目前已知癌細(xì)胞從原發(fā)部位的解離是侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中重要的第一步，明確癌細(xì)胞解離的分子機(jī)制有助于闡明胰腺癌侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制，從而為開(kāi)發(fā)針對(duì)胰腺癌侵襲轉(zhuǎn)移的新型診斷和治療方法提供新的靶標(biāo)。
　　 前期研究中建立兩種具有不同侵襲轉(zhuǎn)移能力的倉(cāng)鼠胰腺癌細(xì)胞系：非解離型低轉(zhuǎn)移株細(xì)胞PC-1和解離型高轉(zhuǎn)移株細(xì)胞PC-1.0,表現(xiàn)為

2、完全不同的生長(zhǎng)方式。非解離型低轉(zhuǎn)移株細(xì)胞PC-1呈島樣細(xì)胞克隆方式生長(zhǎng)，解離型高轉(zhuǎn)移株細(xì)胞PC-1.0呈單個(gè)細(xì)胞方式生長(zhǎng)。此外，EGFR介導(dǎo)的MEK2/ERK2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路通過(guò)破壞解離非解離型胰腺癌細(xì)胞間的緊密連接，從而參與調(diào)控胰腺癌細(xì)胞的解離及侵襲轉(zhuǎn)移。
　　 另外，基質(zhì)金屬蛋白酶-7(Matrix metalloproteinase-7，MMP-7)可以分解很多底物，例如：纖維蛋白、層粘連蛋白、蛋白聚糖、彈性蛋白、明膠、Ⅳ型

3、膠原、聚集蛋白聚糖、巢蛋白[11]。MMP-7在其他蛋白激酶(纖溶酶原、MMP-1、MMP-2、MMP-9等)活化過(guò)程中也起著重要的作用。同時(shí)，MMP-7較其它MMP分子在胰腺癌侵襲的程度、淋巴結(jié)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、以及進(jìn)展期腫瘤的發(fā)展中起著更加重要的作用。但是目前MMP-7調(diào)控侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程的具體機(jī)制尚未完全明確。
　　 目的：
　　 本研究通過(guò)檢測(cè)MMP-7和緊密連接蛋白的表達(dá)，進(jìn)一步闡明MMP-7參與調(diào)控胰腺癌細(xì)胞解離及侵襲

4、轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制。
　　 材料與方法：
　　 一、材料
　　 利用倉(cāng)鼠解離型高轉(zhuǎn)移株胰腺癌細(xì)胞(PC-1.0)和非解離型低轉(zhuǎn)移株胰腺癌細(xì)胞(PC-1)，以RPMI-1640培養(yǎng)液培養(yǎng)，并加10％的胎牛血清、100U/ml的青霉素G和100ug/ml的鏈霉素，于37℃、含5％CO2和95％空氣的孵箱中培養(yǎng)。
　　 二、方法
　　 利用兔抗人的MMP-7、claudin-1、occludin和Z0-1的

5、多克隆抗體為一抗。用若丹明標(biāo)記的熒光抗體做為二抗。我們應(yīng)用細(xì)胞體外侵襲實(shí)驗(yàn)和Western雜交來(lái)明確MMP-7參與調(diào)控胰腺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制。
　　 結(jié)果：
　　 一、Western雜交檢測(cè)胰腺癌中MMP-7的表達(dá)結(jié)果
　　 Western雜交結(jié)果顯示MMP-7在細(xì)胞中以前酶原的形式存在(倉(cāng)鼠胰腺癌細(xì)胞中分子量為27kDa，人胰腺癌細(xì)胞中分子量為28kDa)。僅在PC-1.0和AsPC-1細(xì)胞的培養(yǎng)基上清中

6、檢測(cè)出活化型MMP-7蛋白(倉(cāng)鼠胰腺癌細(xì)胞分子量為17kDa，人胰腺癌細(xì)胞分子量為18kDa)。盡管在未處理的PC-1和Capan-2細(xì)胞培養(yǎng)基上清中前MMP-7蛋白表達(dá)較強(qiáng)，但未檢測(cè)出活化的MMP-7蛋白表達(dá)。此外，AG1478(EGFR抑制劑)或U0126(MEK抑制劑)明顯抑制上述胰腺癌細(xì)胞內(nèi)及培養(yǎng)液上清中MMP-7的表達(dá)。
　　 二、免疫組化的結(jié)果顯示
　　 MMP-7破壞細(xì)胞間的緊密連接，并誘導(dǎo)緊密連接蛋白cl

7、audin-1，occludin和Z0-1轉(zhuǎn)移到細(xì)胞質(zhì)中，調(diào)控胰腺癌細(xì)胞的解離。
　　 三、體外侵襲實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示
　　 MMP-7誘導(dǎo)非解離型胰腺癌細(xì)胞的侵襲能力增強(qiáng)。而原本侵襲能力較強(qiáng)的PC-1.0和AsPC-1細(xì)胞，在加入AG1478或U0126后，細(xì)胞侵襲能力受到抑制。
　　 結(jié)論：
　　 MMP-7可通過(guò)破壞細(xì)胞間的緊密連接并誘導(dǎo)緊密連接蛋白的移位，增強(qiáng)胰腺癌細(xì)胞的體外侵襲能力，誘導(dǎo)胰腺癌的細(xì)胞