染料木素衍生物對乳腺癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的抑制及機制研究.pdf

1、目的：研究染料木素衍生物WH-20對人MCF-7乳腺癌細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的影響，并且初步探討其機制研究，為抗乳腺癌新藥研究提供新思路。
　　方法：
　　1.MTT法檢測染料木素衍生物WH-20對體外培養(yǎng)人MCF-7乳腺癌細(xì)胞增殖抑制的量效性和時效性、經(jīng)Notch阻斷劑(DAPT)、ER阻斷劑（MMP）和ERβ阻斷劑(PHTPP)干擾后染料木素衍生物WH-20處理的MCF-7細(xì)胞的增殖影響；平板克隆檢測 WH-20對人MCF

2、-7乳腺癌細(xì)胞克隆形成能力；流式細(xì)胞術(shù)檢測WH-20對人MCF-7乳腺癌細(xì)胞周期的影響。
　　2.采用基質(zhì)膠黏附實驗、劃痕實驗以及Transwell實驗觀察不同濃度WH-20對細(xì)胞的遷移和侵襲的影響；以及經(jīng)Notch阻斷劑(DAPT)、ER阻斷劑（MMP）和ERβ阻斷劑(PHTPP)干擾后染料木素衍生物WH-20處理的MCF-7細(xì)胞的遷移和侵襲的影響。
　　3.Western Blot檢測不同濃度的WH-20對MCF-7細(xì)胞

3、中周期蛋白CyclinD1、遷移侵襲相關(guān)蛋白MMP9和VEGF的蛋白、ER和ERβ以及Notch信號相關(guān)蛋白Notch1,Jagged1,NF-κBp65,IκB的蛋白表達(dá)；以及經(jīng)Notch阻斷劑(DAPT)、ER阻斷劑（MMP）和ERβ阻斷劑(PHTPP)干擾后WH-20對MCF-7細(xì)胞ER,ERβ,Notch1, Jagged1,NF-κBp65,IκB,CyclinD1,MMP9和VEGF蛋白表達(dá)。
　　4.Aut

4、odock軟件分析WH-20對ER和ERβ蛋白結(jié)合能力。
　　結(jié)果：
　　1.人MCF-7乳腺癌細(xì)胞經(jīng)10、20、40M的WH-20處理后均能夠抑制細(xì)胞的增殖，且隨著時間的增加顯示時間依賴性，能夠使細(xì)胞周期從G1期進(jìn)入S期受到阻滯，且能夠抑制細(xì)胞周期蛋白CyclinD1的表達(dá)。
　　2.濃度為10、20、40M的WH-20能夠抑制MCF-7乳腺癌細(xì)胞基質(zhì)黏附、遷移和侵襲，降低MMP9和VEGF蛋白的表達(dá)。
　　3

5、.WH-20能夠降低Notch信號通路相關(guān)蛋白Notch1,Jagged1,NF-κBp65,IκB的表達(dá)。加入Notch阻斷劑（DAPT）后能夠加強WH-20對MCF-7乳腺癌細(xì)胞增殖、基質(zhì)黏附、遷移和侵襲抑制作用，且Notch1,Jagged1,NF-κBp65,IκB,CyclinD1,MMP9和VEGF蛋白表達(dá)抑制作用加強。
　　4.Autodock軟件分析打分?jǐn)?shù)均大于4成功模擬WH-20與ER和ERβ蛋白結(jié)合能力，打分?jǐn)?shù)

6、分別為7.19和6.21。WH-20能夠增加ER和ERβ蛋白的表達(dá)。加入ER阻斷劑（MPP）后能夠加強WH-20對MCF-7乳腺癌細(xì)胞增殖、基質(zhì)黏附、遷移和侵襲抑制作用，且ER, Notch1,Jagged1,NF-κBp65,IκB,CyclinD1,MMP9和VEGF蛋白表達(dá)抑制作用加強;加入ERβ阻斷劑（PHTPP）后夠減弱WH-20對MCF-7乳腺癌細(xì)胞增殖、基質(zhì)黏附、遷移和侵襲抑制作用，且ERβ,Notch1,Jagged1,