BRG1基因在乳腺癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲中的作用及分子機(jī)制研究.pdf

1、目的：體外研究BRG1基因?qū)θ橄侔┘?xì)胞增殖、遷移和侵襲能力的影響及其分子機(jī)制。
　　方法：siRNA技術(shù)降低乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231和BT-549中BRG1蛋白表達(dá)水平，并用Western Blot驗(yàn)證干涉效果；用CCK-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)分析BRG1基因?qū)煞N乳腺癌細(xì)胞增殖能力的影響；利用流式細(xì)胞分析技術(shù)研究BRG1基因在兩種乳腺癌細(xì)胞周期進(jìn)展中的作用，并利用Western Blot研究BRG1對(duì)多種細(xì)胞周期蛋白(CDK)及細(xì)

2、胞周期蛋白依賴性激酶(CDKIs)的影響；利用Transwell細(xì)胞遷移及侵襲實(shí)驗(yàn)分析BRG1基因?qū)煞N細(xì)胞株遷移及侵襲能力的影響；并利用明膠酶譜實(shí)驗(yàn)分析兩種乳腺癌細(xì)胞分泌至胞外的基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)的變化情況，利用Western Blot檢測(cè)MMPs及基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子(TIMPs)蛋白表達(dá)水平的變化情況。
　　結(jié)果：siRNA技術(shù)能明顯降低MDA-MB-231和BT-549兩種乳腺癌細(xì)胞BRG1基因的表達(dá)；CCK

3、-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，BRG1基因干涉后明顯抑制兩種乳腺癌細(xì)胞的增殖能力；流式細(xì)胞分析技術(shù)及Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示BRG1通過調(diào)節(jié)Cyclin E、Cyclin E2、Cyclin B1和p27的蛋白表達(dá)參與細(xì)胞周期調(diào)控；Transwell細(xì)胞遷移及侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，BRG1表達(dá)降低后明顯抑制兩種乳腺癌細(xì)胞的遷移及侵襲能力；Western Blot及明膠酶譜實(shí)驗(yàn)顯示BRG1通過上調(diào)MMP-9和MMP-2的活性水平和下調(diào)

4、TIMP1和TIMP2表達(dá)水平來促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。
　　結(jié)論：BRG1基因表達(dá)降低通過下調(diào)Cyclin E、Cyclin E2、Cyclin B1蛋白的表達(dá)，同時(shí)上調(diào)p27蛋白的表達(dá)，而使MDA-MB-231和BT-549兩種乳腺癌細(xì)胞均停滯在G1期，最終抑制兩種乳腺癌細(xì)胞的增殖能力。BRG1基因表達(dá)降低通上調(diào)TIMP2和TIMP1的表達(dá)抑制相應(yīng)的基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2和MMP-9的表達(dá)，下調(diào)MMP-2和MMP-9