順鉑通過(guò)激活自噬信號(hào)通路抑制乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的機(jī)制研究.pdf

1、目的：自噬（Autophagy）被稱為Ⅱ型細(xì)胞程序性死亡（programmed cell death，PCD）。化療是乳腺癌的主要治療手段之一，然而自噬是否參與其中，目前尚不完全清楚。本研究擬探討化療藥物是否能通過(guò)自噬途徑抑制乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。
　　方法：1.表阿霉素（EPI）、甲氨蝶呤（MTX）、環(huán)磷酰胺（CTX）、順鉑（DDP）處理乳腺癌細(xì)胞后，檢測(cè)其增殖能力、細(xì)胞周期、自噬相關(guān)基因mRNA的表達(dá)。
　　2.建立穩(wěn)定表達(dá)

2、DsRed-LC3細(xì)胞株，分別用表阿霉素（EPI）、甲氨蝶呤（MTX），環(huán)磷酰胺（CTX）、順鉑（DDP）處理，檢測(cè)自噬小體的形成。
　　3.通過(guò)自噬抑制劑（3-methyladenine，3-MA）阻斷自噬通路，再用表阿霉素（EPI）、甲氨蝶呤（MTX）、環(huán)磷酰胺（CTX）、順鉑（DDP）處理乳腺癌細(xì)胞，檢測(cè)其增殖能力。
　　4.分別用四甲基偶氮唑鹽比色法（MTT法）、流式細(xì)胞術(shù)、實(shí)時(shí)熒光定量PCR、熒光顯微鏡檢測(cè)乳腺癌細(xì)

3、胞的增殖能力、細(xì)胞周期、自噬基因 mRNA的表達(dá)水平、自噬體形成。
　　結(jié)果:
　　1.表阿霉素，甲氨蝶呤，環(huán)磷酰胺和順鉑抑制乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231和MDA-MB-453細(xì)胞增殖能力，并呈劑量和時(shí)間依賴效應(yīng)。
　　2.表阿霉素，甲氨蝶呤，環(huán)磷酰胺和順鉑中，僅順鉑可以誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231和MDA-MB-453發(fā)生自噬。
　　3.自噬抑制劑（3-methyladenine，3-MA）處理后，可

4、削弱順鉑對(duì)乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231和MDA-MB-453抑制增殖的能力，而對(duì)表阿霉素，甲氨蝶呤和環(huán)磷酰胺的抑生長(zhǎng)作用無(wú)明顯影響。
　　4.順鉑誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞發(fā)生G2/M細(xì)胞周期阻滯。自噬抑制劑（3-methyladenine，3-MA）不能削弱化療藥物對(duì)細(xì)胞周期的影響。
　　5.順鉑可以上調(diào)自噬相關(guān)基因mRNA的表達(dá)，包括AMBRA1，ATG3，ATG4C，ATG4D，ATG5,，ATG7，ATG13，ATG14，A