去泛素化酶RPN11促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞增殖和遷移.pdf

1、乳腺癌的發(fā)病機(jī)制尚不明確。泛素化可以在許多方面影響癌癥的發(fā)生和發(fā)展。泛素化是一個(gè)動(dòng)態(tài)的、可逆的過(guò)程;而泛素化的反向反應(yīng)和調(diào)節(jié)是由去泛素化酶控制的。RPN11是一種重要的去泛素化酶，影響細(xì)胞活性及腫瘤轉(zhuǎn)化。有研究顯示RPN11在癌細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)，主要見(jiàn)于黑色素瘤、卵巢癌及白血病細(xì)胞，在這些癌中RPN11可作為惡性腫瘤的標(biāo)志。并可作為癌癥治療的一個(gè)靶點(diǎn)。
　　為探討RPN11在乳腺癌發(fā)病機(jī)制中所起的作用，我們首先檢測(cè)對(duì)比RPN11在乳

2、腺癌及其癌旁組織的表達(dá)情況。采用行業(yè)內(nèi)通用方法qRT-PCR對(duì)研究患者體內(nèi)癌組織中RPN11的表達(dá)，結(jié)果顯示較癌旁組織，乳腺癌組織高表達(dá)RPN11。此外，我們檢索并分析GSE3744數(shù)據(jù)集，該數(shù)據(jù)集包含47例乳腺癌數(shù)據(jù)，也同樣發(fā)現(xiàn)乳腺癌組織中高表達(dá)RPN11。我們應(yīng)用western blot的方法檢測(cè)6例乳腺癌新鮮組織及其癌旁組織中RPN11的表達(dá)，也發(fā)現(xiàn)RPN11在乳腺癌組織中高表達(dá)。我們通過(guò)免疫組化的方法檢測(cè)RPN11在142例乳腺

3、癌病例的組織芯片中的表達(dá)情況。結(jié)果顯示，RPN11在正常組織中表達(dá)微弱，在乳腺癌組織中高表達(dá)。同時(shí)，RPN11高表達(dá)與高臨床分期密切相關(guān)(P＜0.05)。
　　在乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231及T47D中，我們應(yīng)用siRNA的方法研究降低RPN11表達(dá)后對(duì)細(xì)胞增殖的影響。通過(guò)應(yīng)用MTT法檢測(cè)，結(jié)果表明降低RPN11的表達(dá)顯著抑制乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231及T47D的增殖。此外，我們應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)了RPN11對(duì)細(xì)胞凋亡及

4、細(xì)胞周期的影響。同樣，數(shù)據(jù)表明敲低RPN11的表達(dá)可引起細(xì)胞凋亡率的提高以及細(xì)胞周期抑制。其中我們還觀察到，RPN11表達(dá)的降低誘導(dǎo)細(xì)胞周期在G0/G1停滯。另外，我們通過(guò)westernblot的方法檢測(cè)了細(xì)胞周期蛋白D1及c-PARP的表達(dá)，結(jié)果表明，敲低RPN11的表達(dá)可上調(diào)c-PARP的表達(dá)，抑制細(xì)胞周期蛋白D1的表達(dá)。相反，我們?cè)谌巳橄侔┘?xì)胞系MCF7及Hs578T中通過(guò)高表達(dá)載體過(guò)表達(dá)RPN11，結(jié)果表明過(guò)表達(dá)RPN11促進(jìn)細(xì)

5、胞增殖，使細(xì)胞周期進(jìn)展，抑制凋亡。
　　Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，敲低RPN11的表達(dá)后乳腺癌細(xì)胞的遷移能力下降。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)是腫瘤細(xì)胞具有遷移能力的重要一步。我們通過(guò)qRT-PCR的方法檢測(cè)敲低RPN11后EMT相關(guān)基因的表達(dá)。我們發(fā)現(xiàn)E-cadherin表達(dá)上調(diào)，N-cadherin、FN1及vimentin表達(dá)下降。EMT相關(guān)的調(diào)節(jié)因子如Snail(SNAI1)和Slug(SNAI2)也同樣受抑制。Weste